药物小肠代谢的研究的方法.pptVIP

药物肠代谢的研究方法 王晓扬  药物肠代谢研究方法 体外法 体内法  体外法 体外方法是研究小肠内药物代谢酶的主要方法, 体外代谢研究可以排除体内因素干扰。直接观 察酶对底物的选择代谢性,为整体实验提供可 靠的理论依据。对于体内代谢转化率低、毒性 大及缺乏灵敏检测手段的药物,体外代谢研究 是一种良好的研究方法。  体外法 一.肠微粒体法 离体消化道内容物温孵法 粪便或肠内容物温孵法 单一菌种温孵法 肠菌酶法 普通动物、悉生动物、无菌动物的 代谢产物比较法 、Caco-2细胞模型法 四完整小肠结肠组织切片法  肠微粒体法 方法:肠微粒体法是由制备的肠微粒体与CYP450特定的探 针药物在模拟生理温度及生理环境条件下进行生化反应的 体系,制备肠微粒体一般采用差速离心法 优点:酶制备技术简单、代谢过程快、结果重现性好、易大 量操作、便于积累代谢样品供结构研究等优点。同时,该 方法可用于对药酶的抑制及体外代谢清除等方面的研究, 因而在实际工作中应用较为普遍。 缺点:肠微粒体体外温孵法与其他体外肠代谢方法相比。与 体内情况的一致性方面存在不足,如缺乏膜转运体及一些 统的影响,且很大程度上依靠微粒体分离结果的好坏。  粪便温孵法 ·方法:用富含肠内菌的动物或人的粪便悬浮液 与药物在厌氧条件下温孵,检测原型成分及其 代谢物的种类和含量。 优点:离体实验法具有速度快,可调控的优点  单一菌种温孵法 方法:即用单一菌种与药物共同进行厌氧培 养,然后检査药物代谢情况的方法 优点:利用单一菌种代谢药物条件易于控制, 有利于进一步对代谢药物的特种酶的纯化 缺点:目前,公认的、有代表性的肠道菌有45 多种,利用它们与药物一同进行温孵,结果 发现不如肠道混合菌代谢药物明显  肠菌酶法 方法:明确对药物中某一有效成分 起到代谢转化作用的特定代谢菌株 并从细菌中分离、纯化和鉴定真正 起到代谢作用的代谢酶,把由肠菌 中分得的酶作用于药物,间接地研 究肠道菌对药物作用的方法。 [  普通动物、悉生动物、无菌动物的代谢 产物比较 方法:将无菌动物经口服预培养好的菌液制 备成带有特殊菌种的悉生动物,分别给普通 动物、悉生动物、无菌动物药物后,检测其 代谢产物的不同。 优点:无菌动物的免疫功能低下,其消化道 态和生理都与普通动物有区别,考察药物 多者体内的药效发挥,能直观看出肠道菌 发挥作用。  caco-2细胞模型法 方法:细胞模型预测主要采用的是一种结肠 癌细胞(Caco-2),其结构和生理生化作 用类似人体小肠上皮细胞,具有各种体内代 谢酶及主动转运的载体,因此药物在Caco 2细胞的代谢与药物在小肠上皮细胞的代谢 具有很好的相关性。将Caco-2细胞接种于 含药培养基中培养,检测药物的代谢产物 「我师东