菌种保存与复壮.pptVIP

菌种的保存与复壮 兰州市食品药品检验所 周斌 2013.05.25  菌种保藏 )菌种保藏的目的 菌种是国家的重要自然资源,菌种 保藏是一项重要的微生物学基础工作。 菌种保藏的目的是保证菌种能够保持其 原来的生活能力,不发生变异,不被其 他杂菌污染,不死亡,以便能够很好地 研究和利用微生物  )菌种保藏的原理 微生物菌种保藏技术很多,但原理基本一致。菌 种保藏主要是根据微生物是生理、生化特性,创造 条件使其代谢处于不活泼的休眠状态,生长繁殖受 到抑制,从而降低菌种的变异率。从微生物本身来 讲,菌种的保藏首先要选用优良的纯种,最好是休 眠体,从环境条件来讲,主要是通过低温、干燥、 缺氧、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂等手段 使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的 休眠状态。并且尽可能多的采用不同的手段保藏 些比较重要的微生物菌株。  三)菌种保藏的方法 各种微生物由于遗传特性不同,因此 适合采用的保藏方法也 种良 好有效的保藏方法,首先应能保持原菌 的优良性状长期不变 还须考 虑方法是通用性、操作的简便性和设备 的普及性。 常用的菌种保藏方法有低温保藏法 色空气保藏法、干燥保藏法和寄主保 4大类。  1、低温保藏法 低温可以抑制微生物的代谢繁殖速度,降 低突变率,是一种简单有效的保藏菌种的方 法。将菌种接种在斜面培养基上,待菌种充 分生长后用牛皮纸将斜面棉塞包好,放入4℃ 的冰箱中保藏。可保藏1~3个月,移种培养 后,可继续保藏。细菌、酵母菌、放线菌和 霉菌都可以采用这种方法保藏。此法的优点 是方法简便,易于推广,对大多数微生物都 适用。缺点是保藏期太短,菌体仍有一定的 代谢活动,容易发生变异。  1、低温保藏法 近年来采用一种超低温菌种保藏方法 效果比较理想,能保存所有的微生物菌 种,使微生物的代谢处于停止状态,菌 种产生变异的可能性极小。其做法是采 取措施将菌种进行密封,然后放入 196℃~-150℃液体氮罐中。此法可长 期保藏菌种。  2、隔绝空气保藏法 此法主要是通过限制氧的供应来减弱微生物的 代谢活动,因此不适用于厌氧菌 (1)液体石蜡保藏法:将经过灭菌的液体石蜡 倒入培养好的菌种的斜面试管内,使石蜡油面高岀 琼脂斜面末端1cm。直立试管,放入4℃冰箱内保存。 此法简便易行,保藏的时间可达1年以上。但不适 用于保藏以石蜡等为碳源的微生物 (2)橡皮塞密封保藏法:当斜面菌种长到最好 时,用灭菌橡皮塞将原有的棉塞换掉,塞紧,用石 蜡密封,放在室温下暗处或4℃冰箱中保藏  3、干燥保藏法 通过断绝对微生物的水分供应,使微生物的代谢活动降低 (1)沙土管保藏法:适用于产生孢子的真菌、放线菌和 真空千燥后放入干燥器内置子4℃冰箱 保存1~10年 2)真空冷冻干燥法:真空冷冻干燥法又称冷冻干燥保 藏法,简称冻 前最理想的菌 存期可达5~20年,除 子的丝状真菌不宜用此法外 它广泛适用于细菌、酵母菌、丝状真菌、放线菌和病毒的 其过程是先将微生物制成菌悬液 奶或血清等)混合,然后使其在30℃ 并抽真空使其中水分 燥,低温 应用此法保存的 微生物存活率高,变异率低。但手续比较麻烦,需一定的设  3、干燥保藏法 ■(3)麸皮保藏法:又称曲法保藏,类 似于民间的大曲保藏法。将麸皮与水根 据不同菌种的要求按1:0.8或1:1或1:1.5 比例惨和,装入试管,高温灭菌后,接 入菌种和孢子液进行培养,待孢子长出 菌丝,再放入干燥器中干燥,然后置低 温下保藏,可保存1年以上。  4、寄主保藏法 又称活体保藏法。此法适用于 些难于用常规方法保藏的动植物病 原菌和病毒。它们只能寄生在活着 的动植物或其他微生物体内,因此, 可以将此类微生物与寄主细胞混合, 低温保藏。