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? Z － DNA 的生物学意义： ? DNA 链的局部不稳定区的存在就成为潜 在的解链位点。 ? 认为这一结构与基因调节有关。 ? 此外， DNA 螺旋上沟的特征在其信息表 达过程中起关键作用。 3 、 DNA 的三级结构（高级结构） 3.1 DNA 超螺旋 ? 双螺旋 DNA 进一步扭曲盘绕则形成其三级结 构，超螺旋是 DNA 三级结构的主要形式。 ? 超螺旋按其方向分为 正超螺旋 和 负超螺旋 两 种。真核生物中， DNA 与组蛋白八聚体形成 核小体结构时，存在着负超螺旋。研究发现 ，所有的 DNA 超螺旋都是由 DNA 拓扑异构酶 等产生的。 三、 DNA 的复制 ? DNA 做为遗传物质的基本特点就是在细 胞分裂前进行准确地 自我复制 (self replication) ，使 DNA 的量成倍增加，这 是细胞分裂的物质基础。 1 、 DNA 的半保留复制 ? 新合成的子代 DNA 分子中一条链来自 亲代 DNA ，另一条链是新合成的，这 种复制方式为半保留复制。 ? 1958 年 Meselson 和 Stahl 利用氮标记技 术在大肠杆菌中首次证实了 DNA 的半 保留复制（实验验证） DNA 的半保留复制第 一代分子含有一条亲代 的链 ( 用黑色素示 ) ，与 另一条新合成的链 ( 用白 色表示 ) 配对。在以后的 连续复制过程中，原来 亲代的两条链仍然保持 完整，因此总有两个分 子各具有一条原来亲代 的链。 2 、 DNA 复制的一般过程： ? DNA 双螺旋是由两条方向相反的单链组成 ? 形成一个复制叉 ? 生物体内 DNA 聚合酶只能催化 DNA 从 5′→3′ 的方向合成。 在以 3 ′→ 5 ′ 方向的母链为模板时，复制合成出一 条 5 ′→ 3 ′ 方向的 前导链 (leading strand) ，前导链的前 进方向与复制叉打开方向是一致的，因此前导链的 合成是连续进行的，而另一条母链 DNA 是 5 ′→ 3 ′ 方向 ，它作为模板时，复制合成许多条 3 ′ → 5 ′ 方向的短 链，叫做 随从链 (lagging strand) ，随从链的前进方 向是与复制叉的打开方向相反的。随从链只能先以 片段的形式合成，这些片段就叫做岗崎片段。 大肠杆菌 DNA 的复制需要有 20 种左右的酶和蛋白质因 子参与，整个 DNA 复制机器被称之为 DNA replicase system 或 replisome 。其中： ? Helicase ： 任何 DNA 在被复制前都必须解开双链，这 个过程是由 helicase 来完成的，它可在 ATP 的作用下将 DNA 母链不断解开形成单链。 ? Topoisomerase ： 主要功能是消除 DNA 解链过程中所 产生的扭曲力。 ? DNA 结合蛋白： 使新解链的 DNA 保持稳定结构。 ? Primases ： 为 DNA 复制提供 RNA 引物。 ? DNA polymerases ： 合成新生 DNA 链，切除 RNA 引物 ? DNA Ligases ： 使新生 DNA 链上的缺口（ 3-OH, 5-p ）生成磷酸二酯键。 DNA 的复制可被分为三个阶段，即复制起 始、延伸和终止。每个 DNA 复制的独立单 元被称为复制子（ replicon ），主要包括复 制起始位点（ Origine of replication ）和终 止位点 2.1 DNA 复制的起始点 ? 原核生物的整个染色体上一般只有一个复制起始位点。 ? 真核生物中， DNA 的复制是从许多起始点同时开始的，所 以每个 DNA 分子上有许多个复制子。 ? DNA 复制起始点有 结构上的特殊性 ，例如：大肠杆菌染色 体 DNA 复制起始点 Oric 由 422 个核苷酸组成，是一系列对称 排列的反向重复序列，即回文结构。 ? 该序列在所有细菌复制起始位点中都是 保守 的。 DNA 复制起始中的主要步骤 a. 大约 20 个左右的 DnaA 蛋白首先与 OriC 中的 4 个 9 碱基重复区相结合； b. 识别并使 3 个 13 碱基串联重复区 DNA 形成开环 结构； c. DnaB 蛋白在 DnaC 的帮助下与未解链序列结合 。每六个 DnaB 蛋白形成一组并与一条 DNA 母链结 合，可在不同方向同时起始 DNA 的复制。当细胞 中存在足够的 SSB 和 DNA 解旋酶 时， DnaB 的解链 效率非常高。 整个 DNA 复制过程