ABO和RhD血型鉴定操作作业规程盐水法.docVIP

ABO和Rh (D) 血型判定操作规程（盐水法） 一．目标 规范ABO/Rh (D) 血型判定操作步骤；确保临床用血安全性及有效性。 二．职责 血库技术人员负责ABO和Rh (D) 血型判定。 三．适用范围 适适用于血库ABO和Rh（D）血型判定血标本。 四．所需材料和设备 1.材料 抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。 2.设备 一般离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。 五．操作步骤 1.将标本 r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清和红细胞分离，并吸收红细胞配制3%悬液。 2.取小试管3支，分别标明-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红细胞悬液1滴，混匀。 3.另取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入3% A、B、O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。 4.以1000r/分钟离心1分钟。 5.将试管轻轻摇动，使沉于管底红细胞浮起，先以肉眼观察有没有凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检验。 6. ABO血型结果判定（见下表）： ABO血型结果判定 分型试剂+受检者红细胞（正定型） 受检者血清+试剂红细胞（反定型） 抗-A 抗-B A细胞 B细胞 O细胞 血型 ＋ － － ＋ — Ａ － ＋ ＋ － — Ｂ － － ＋ ＋ — Ｏ ＋ ＋ － － — AB 注：“＋” 凝集；“－” 不凝集 Rh（D）血型判定： 红细胞和抗-D试剂凝集为Rh (D) 阳性 无凝集为Rh阴性。 8.凝集强度判定标准： 4+ 红细胞凝集成一大块，背景清楚透明； 3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清楚； 2+ 红细胞凝块分散成很多小块，背景可见到游离红细胞； 1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞； ± 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有很多游离红细胞； 混合外观凝集（Mixed Field, MF）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布； － （阴性） 镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 六．注意事项 1.单克隆抗体试剂和试剂细胞（除谱细胞外）每次使用前必需和相对应红细胞和血清做阳性、阴性对照，以检测其活性。 2.观察结果时既要看有没有凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有利于A、B亚型、类B或Cis（顺式）AB发觉。 3.人红细胞ABO血型检验结果是依据红细胞抗原和血清/血浆中抗体反应结果所决定，所以正反定型结果应该一致。正反定型起到一个相互验证和质控作用。只有正反定型结果相符才能正确判定ABO血型。 4.反定型对ABO亚型发觉尤其有帮助。原因是亚型患者细胞上A或B 抗原很弱，经过正反定型易于发觉二者结果不一致，从而引发警惕。 5.假如正反定型不一致，则需深入判定。可在正定型试验中增加抗-A1、抗-AB及抗-H；反定型试验中增加A2、O及本身细胞。正定型试验中抗-AB是用来确定弱A和弱B抗原，抗-A1用来判定A亚型，抗-H用于判定亚型及孟买型；反定型试验中A2细胞用于判定A2亚型，O型细胞用于判定是否存在ABO系统以外同种抗体影响型，本身对照用于判定是否存在本身抗体影响定型。假如是O型细胞或本身对照为阳性，则定型结果不可靠，必需深入进行血型判定。 6.ABO正反定型不一致原因： （1） 新生儿还未形成ABO同种抗体，所以三个月内新生儿只要求做正定型确定ABO血型。 （2） 漏加试剂，试剂污染或失效、血标本和试剂搞错等，均可造成假阴性、假阳性结果。 （3） 器材不洁可产生假阳性结果。 （4） 分型血清效价太低，亲和力不强等均可使凝集反应强度减弱，易误定血型。 （5） 红细胞悬液过浓或过淡，造成抗原抗体百分比不合适，出现前带或后带现象，易误判为假阴性。 （6） 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或一些恶性肿瘤）和类B或CisAB等，均可使凝集反应强度减弱。 （7） 受检者血清蛋白紊乱（如巨球蛋白血症）或试验温度过高，常引发细胞呈缗线状排列。 （8）受检者血清中缺乏应有抗-A或抗-B，如丙种球蛋白缺乏症，可引发正、反定型不符。 （9）多种原因引发红细胞溶血，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了对应抗体，或患者血清中血型物质过多，中和了对应抗体，可造成假阴性结果。 （10）由细菌污染或遗传原因引发多凝集或全凝集往往是正反定 型不符原因。近期曾输过异型血，使患者血液标本成为不一样型别红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝聚”现象