实验一-碱裂解法提取质粒DNA.docxVIP

实验一、碱裂解法提取质粒 DNAR检测 一、 实验目的与原理简介 实验背景：质粒DNA的提取是基因工程操作中常用的基本技术。质粒作为载 体应具备下歹0四个特点： 有足够的容纳目的基因的幅度，并且对于携带的目的基因能够借助载体 的复制和调控系统得到忠实的复制与增殖。 在非必要的DNA克隆区有多种限制性核酸内切酶的单一识别位点，易 于基因片段与载体的连接、重组与筛选。 与宿主细胞有相同一个或多个遗传表型（如抗药性、营养缺陷型或显色 表型反应等）。 拷贝数多，易于宿主细胞的DNA分开，便于分离提纯。 分离质粒DNA的方法包括三个基本步骤：培养细胞使质粒扩增；收集和裂解 细菌；分离和纯化质粒DNA。 实验原理：碱裂解法质粒 DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性 的差异而达到分离目的的。在强碱性pH时，染色体线性DNA的氢键断裂，双螺 旋结构解开而变性。质粒 DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的 两条互补链不会完全分离，调节pH值至中性时，变性的质粒DNA乂恢复到原来 的构型，而染色体DNA不能复性纠缠形成网状结构，经过离心，染色体 DNA与 不稳定的大分子RNA蛋白质-SDS复合物等一直沉淀下来而被除去。 实验目的：提取基因工程中运载基因的载体，掌握最常用的提取质粒 DNA的 方法。 实验试剂 Soli 100ml: 1M Tris-HCL（）, 0.5M EDT