放线菌的形态观察.pdfVIP

. 【实验题目】 放线菌的形态观察 【实验目的】 1、掌握放线菌观察方法—插片法 2、了解放线菌的基本形态 【实验器材】 1、菌种： 青色链霉菌、弗氏链霉菌 2、培养基： 灭菌的高氏Ⅰ号琼脂培养基 3、仪器和用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、培养皿等 【实验原理】 1 ． 高氏 I 号培养基 高氏 I 号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要 特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混 合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分 分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏 I 号培 养基中，需要加入 FeSO4。 2 ． 放线菌 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成 菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝 ，基丝生长到一定阶段还能向空 气中生长出气生菌丝 ，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基内菌丝而无气 生菌丝。 在显微镜下直接观察时，气生菌丝在上层、基内菌丝在下层，且气生菌丝较暗，基 内菌丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放 线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特 征是放线菌分类鉴定的重要依据。 1 / 5 . 图 1：链霉菌一般形态和构造（模式图） 1- 直形，交叉分枝 2- 丛生，波曲 3- 顶端形成大螺旋 4- 松螺旋 5,6- 紧螺旋 7- 短而直，轮生 图 2：链霉菌属孢子丝的主要类型 3． 插片法 将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与 盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。 这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 1-盖玻片 2-琼脂层 图 3 【实验内容及步骤 】 1、高氏 I 号培养基的制备（ 100ml） 1) 根据配方按照一定比例称取可溶性溶粉、及 其他成分溶解。 2) 待将所有药品溶解后，补充水分到所需的总体积，进行 pH调节到 7.2 ～7.4 3) 材料灭菌：将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻绳捆好， 用记号笔标记组号。取 4 个平皿，包好并标记。同理盖玻片也用牛皮纸包好， 10 片一包，准 2 / 5 . 备 4 包。将上述物品放入密封的加压灭菌锅中进行高压蒸汽灭菌 121℃、20 分钟。 2、插片法