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强精煎抑制实验小鼠睾丸生精细胞 凋亡的机制研究 【摘要】 目的观察强精煎对实验小鼠 睾丸Fas和Fasl蛋白表达的影响，探讨其 抑制生精细胞凋亡的机制。方法将 80只健 康雄性昆明种小鼠分为正常组、模型组，强 精煎组、黄精赞育胶囊组，除正常组用生理 盐水外其他各组均以环磷酰胺注射液 40 mg/kg腹腔注射造模，造模成功后，正常组 及模型组分别给予蒸偕水，后两组分别给予 相应药物灌胃 治疗30 d。第31天处死小 鼠，利用H-E染色观察小鼠睾丸病理形态， 用免疫化学SABC检测Fas和Fasl蛋白在 小鼠睾丸实质组织中的表达。 结果与模型组 比较，强精煎组和黄精赞育胶囊组睾丸 Johnson评分偏高，Fas和Fasl蛋白的表达 率偏低（）；与空白组比较，模型组 Johnson 评分偏低，Fas和Fasl蛋白表达率偏高（）； 强精煎组和黄精赞育胶囊组差异无学意义 （）。结论强精煎可以下调 Fas和Fasl蛋白 在受损伤小鼠睾丸实质组织中的表达， 这可 能是其抑制生精细胞凋亡的分子机制之一 【关键词】 强精煎；生精功能障碍；实 验研究 大量研究表明，生精细胞的过度凋亡是导致 生精功能障碍的重要病因，而 Fas/Fasl系 统在生殖细胞的凋亡中又起着重要作用。 我 们前期的研究显示，以补肾健脾为主要功效 的中药强精煎具有抑制环磷酰胺所致小鼠 睾丸生精细胞过度凋亡的作用，而该作用机 制是否也与Fas/Fasl系统有关尚不清楚， 为此笔者进行了初步探索。 1材料 药物强精煎（方，主要由菟丝子、枸杞 子、益母草、当归、党参、牡蛎组成 ），为 提高本实验的可重复性，采用单味中药配方 颗粒，由江苏省江阴天江药业有限公司生产， 批号：0803193,将各单味药物倒入量杯， 加入100C蒸储水，充分混匀，配成药物浓 度为g/ml的混悬液，密封，置 4C冰箱保 存备用。黄精赞育胶囊（由何首乌、黄精、 菟丝子、枸杞子、五味子、熟地黄等组成）， 上海新亚药业邢江有限公司生产， 批号： 080101。去除胶囊外壳，将胶囊内药物颗 粒研磨成粉状，80目过筛后，加入蒸储水继 续研末5 min，配成药物浓度为 5 g/ml的 混悬液，密封，置4 C保存备用。 试剂注射用环磷酰胺（CP）,江苏恒瑞医 药股份有限公司生产，生产批号 以源化钠注射液配制成 4 mg/ml的溶液， 现配现用;Bouin液：将冰醋酸、甲醛、苦味 酸饱和水溶液按1 ： 5 ： 15比例配制，现配 现用；即用型Fas、Fasl多克隆抗体及SABC 免疫组化染色试剂盒（标记长臂的生物素羊 抗兔IgG、亲和素、过氧化物酶），底物DAB 显色试剂盒，PBS缓冲液，均购自武汉博士 德生物工程有限公司。 动物8?9周龄健康雄性昆明种小鼠 80 只，清洁级，体重（33 土）g,由广西医科大 学实验动物中心提供，许可证号： SCXK圭 2003-0003,购回后饲养在广西中院动物实 验中心，检疫1周，根据体质量采用随机数 字表法随机分为4组，即正常组、模型组、 黄精赞育胶囊组和强精煎，每组 20只。 2方法 造模及给药方法采用环磷酰胺致小鼠 生精功能障碍模型，方法 参考 陈守真法， 除正常组给予等剂量生理盐水外，其余各组 以环磷酰胺每天按40 mg/kg体重进行腹腔 注射，1次/d ,连续5 d。造模结束后第1 天即给予药物治疗。对照组及治疗组分别灌 胃黄精赞育胶囊混悬液或强精煎混悬液 ml/d（按体质量30 g的小鼠体表面积折算均 相当于体质量60 kg的成人用量），正常组 和模型组均以等量蒸储水代替， 1次/d ,连 续30 d。第31天用颈椎脱臼法处死小鼠， 取左侧睾丸，放在 Bouin液中固定，24 h内 取出，用自动脱水机脱水后，用包埋机包埋 成蜡块备用。 睾丸组织病理形态的观察将已经用石蜡包埋的睾丸标本切成厚约 4 m的连续石 蜡切片，HE染色，光学显微镜下观察其病理 形态，采用Johnson评分法评价精子发生和 精子发生障碍的程度。生精功能正常为 10 分；各期生精细胞存在，但排列紊乱为 9分; 生精小管中有少量精子（5?10个）为8分; 无精子，但有许多精子细胞为7分；无精子， 仅有少量精子细胞（5?10个）为6分；无精子, 但有许多精母细胞为 5分；无精子细胞，仅 有个别精母细胞（5个）为4分;仅有精原细胞 为3分；无生精细胞，仅有支持细胞的为 2 分；管腔内无细胞为1分。评分越高精子发 生越好，反之，精子发生障碍程度越严重。 睾丸组织Fas及Fasl蛋白表达情况的 检测严格按照博士德公司所提供的免疫组 化SABC操作步骤分别检测 Fas和Fasl , 用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照，用已 知的阳性组织作为阳性对照。 镜检睾丸组织 细胞膜或细胞质内出现棕黄色或