(完整word版)分光光度法测细菌浓度11月18日.docVIP

型分光光度计 用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度 实验目的： 通过对同一菌液同时测吸光度值与平板菌落计数，将两个结果做标准曲线。标准曲线做出后， 通过测吸光度值间接反应菌悬液的浓度，用于指导菌悬液的制备。 实验设备： U-2900 波长为 600nm 比色皿厚度： cm 实验材料：空白对照液： 0.9%无菌氯化钠溶液 稀释液： 0.9%无菌氯化钠溶液 营养肉汤培养基 实验菌种：金黄色葡萄球菌（新鲜培养物） 实验步骤： 1.将金黄色葡萄球菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中， 在 30～ 35℃恒温培养箱中培养 18～24h。 在无菌阳性室按无菌操作将培养后的金黄色葡萄球菌用 0.9%无菌氯化钠溶液稀释成不同浓度的菌悬液 。具体为分别吸取营养肉汤培 养液 0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml，0.6ml，0.7ml 到 10ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释成 7 种不同浓度的原始菌悬液。序号分别为 1-7 号。 2.1 平板菌落计数法测活菌浓度 取 14 个营养琼脂培养基平板，分别从每个原始菌液中，取 0.2m 的菌悬液，用平板涂布法，涂于平板中，标明序号，每个稀释度涂 2 块平板 . 37℃培养箱培养 72 h 后，可见菌落形成，选取菌落数在 3 0~300 间的平板进行计数， 每组稀释度相同的平板取平均值作为菌落数. 计算出原菌液细菌浓度，作为细菌菌液的标准浓度。 2.2 分光光度法测菌悬液吸收值 同时将以上 5 种原始菌液在波长为 600nm 下测定吸光度。用 0.9% 无菌氯化钠溶液作为空白对照，记录各原始菌液的吸光度值。 表一：平板菌落计数与吸光度值对比记录 序号 吸取原培养 加样到平 稀 释 原始菌液的 液的量（ ml ） 板上的量 倍数 平板计数菌落数 吸光度值 含菌量（ cfu） ---原始菌液 （ml） （cfu） 1 0.1 0.2 5 倍 0.018 2 0.2 0.2 5 倍 0.029 3 0.3 0.2 5 倍 0.049 4 0.4 0.2 5 倍 0.058 5 0.5 0.2 5 倍 0.076 6 0.6 0.2 5 倍 0.082 7 0.7 0.2 5 倍 0.102 结果计算 对同一菌液同时测吸光度值与进行平板菌落计数， 将平板菌落计数所得菌液 浓度作为细菌标准浓度 c. 根据所测出 A 值以及相对应的标准浓度 c 值，作出标 准曲线。