酶活力计算公式（一）.pdfVIP

固态发酵漆酶活性测定： 酶液制取：5g 发酵样品以1:20 （W/V ）比例用蒸馏水悬浮，200 r/min 摇3h，之 后5000 r/min 离心20min 。（上清用0.45µm 滤纸过滤，于-20 ℃保存滤液，取能 整除的滤液体积用于漆酶活性测定。） 酶活反应体系3.0mL （2.3mL 0.2mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL 粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L 的ABTS） 420nm 处测定吸光值的变化。 此实验固态发酵漆酶活性计算公式： 3 N V OD420 10 100mL U(/ g) 总  V酶 36000T L 0.5mL 5g N ：酶液稀释倍数 V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL ） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL ） △OD420 : t 时间内反应液在420nm 处吸光度的增加值 36000: 420nm 处ABTS 氧化态的摩尔吸光系数(L/mol ·cm) T ：反应时间（min ） L 为比色皿的直径（cm ）。 100mL/(0.5mL×5g) ：固态变成液态的稀释倍数 1 液态发酵漆酶活性测定： 酶活反应体系3.0mL （2.3mL 0.2mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL 粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L 的ABTS） N V  OD420  103 U(/g) 总 V  36000  T  L 酶 N ：酶液稀释倍数 V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL ） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL ） △OD420 : t 时间内反应液在420nm 处吸光度的增加值 36000: 420nm 处ABTS 氧化态的摩尔吸光系数(L/mol ·cm) T ：反应时间（min ） L 为比色皿的直径（cm ）。 2 固态发酵锰过氧化物酶（MnP ）活性测定： 酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔 2 d 取 5 g 发酵物于 250 mL 三角 瓶中，加入 100 mL H O ，在 200 r / min 的摇床中振荡提取 3 h ，之后5000 r/min 2 离心20min 。（用滤纸过滤后，取滤液用于测定MnP 酶活性。） 在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L( pH 4 ～5) 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL，1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 ℃ 时，加 1. 6 mmol / L 的 H O 溶液 0. 1 mL 启动反应。在 238 nm 紫外光处，测定反应 4 min 内 2 2 OD238 差值。在对照组中，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替 H O 溶液，其他反应物不变。每分钟使1 μmol/L 的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的酶 2 2 量为 1 个酶活力单位( U) 。(ε238 = 6.5mM-1.cm-1) 此实验固态发酵MnP 活性计算公式： 3 N V OD