植物生物关键技术样本.doc

绪论 一、植物生物技术概念 广义植物生物技术：提升和改良植物产量和品质全部技术。它关键包含植物组织培养（植物细胞工程）、植物基因工程和分子标识及其辅助育种三大部分。 狭义植物生物技术：利用植物器官、组织、细胞和分子水平上操作，促进植物繁殖、有用物质生产和品种遗传改良技术。 3、基因工程改良目标 投入特征 关键是指帮助植物降低成本、提升产量或降低使用防治病虫害和杂草多种费用。 　研究内容： 抗多种虫害危害；抗多种除草剂；抗病毒、细菌、真菌等多种病害；忍耐高温、低温、涝害和高盐胁迫等多种环境胁迫。 产出特征 关键是指帮助植物提升品质和增加产量。 附加特征 五、细胞工程应用 细胞工程应用（1）　——快速繁殖　　　 细胞工程应用(2) ——脱毒苗生产 细胞工程应用（3）——胚培养 细胞工程应用（4）—— 单倍体和多倍体培养 细胞工程在育种上应用（5）——原生质体培养和体细胞杂交 细胞工程应用（6） ——种质资源离体保留 细胞工程应用（7）——次生代谢物生产 细胞工程应用（8）——人工种子生产 第一章 植物组织培养试验室建设和离体操作技术 一．植物组织培养概述 （一）植物组织培养多个基础概念 植物组织培养（Plant tissue culture） 经过无菌操作，把植物体器官、组织、细胞甚至原生质体，接种于人工配制培养基上，在人工控制环境条件下进行培养，使之生长、繁殖或长出完整植株技术和方法。用来培养材料即外植体通常是离体，所以又叫植物离体培养(plant in vitro culture)。 外植体 ( Explant ) 从活体上切取下来用于培养那部分组织、器官或细胞。 植物细胞全能性(totipotency)：一个生活细胞含有产生完整生物个体潜在能力称之为细胞全能性（植物组织培养理论基础） 脱分化(dedifferentiation) ：一个成熟细胞转变为分生状态过程。 去分化(redifferentiation) ：离体培养植物组织和细胞形成处于脱分化状态细胞（愈伤组织），再度分化成另一个或多个类型细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整植株过程。 （二）植物组织培养分类 培养方法 1 . 依据培养方法 固体培养（Solid culture ） 液体培养（Liquid culture ） 液体培养又有液体悬浮培养和静置培养之分。 固液培养（Solid- liquid culture ） 看护培养（ Nurse culture ） 饲喂层培养 (Feeder layer culture) 微室培养 (Microchamber culture) 最常见是固体培养和液体培养，它们相比，各自优缺点表现为： 固体培养 优点：通气性很好，若有污染，只污染局部 缺点：使培养材料和培养基接触不充足，有毒物质易积累。 液体培养 优点：有利于培养材料和培养基充足接触且有毒物质不易积累。 缺点：一旦污染，则材料全部污染，且通气性不好。 2 依据培养过程 初代培养(Primary culture) 从活体植株上切取下来进行第一次培养。 继代培养（Subculture） 经过初代培养材料，转移到新鲜培养基上进行培养过程。 3. 依据培养材料(外植体) 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生质体培养 二、植物组织培养培养基 1. 无机营养(Inorganic element) 依据国际植物生理协会提议：将植物所需元素浓度以0.5 mmol/L为标准分为大量元素和微量元素。 2.有机化合物 糖是组培材料必不可少碳源和能源，另外糖类添加还有调整培养基渗透压功效。最常见碳源是蔗糖，葡萄糖、果糖也是很好碳源。 3。植物生长调整剂 生长素和细胞分裂素百分比决定着形态分化方向。 4. 凝固剂、pH和其它成份 第二章 植物细胞形态建成 一、愈伤组织诱导 1、概念 愈伤组织:原指植物组织受到伤害后表面形成保护组织。 愈伤组织:在组织培养中,是指在培养基上由外植体长出来一团活跃生长薄壁细胞。 用途：愈伤组织能够经过液体悬浮培养产生单细胞， 也能够在合适培养条件下再生出完整植株。 2、诱导 1）. 外植体选择 ①大小要适宜,不宜太小。外植体组织块要达成2万个细胞（5-10mg）以上才轻易成活； ②同一植物不一样部位外植体，其细胞分化能力、分化条件及分化类型有相当大差异；通常植物胚和幼龄组织器官比老化组织、器官更轻易去分化，产生大量愈伤组织； ③不一样物种相同部位外植体其分化能力可能大不一样。 理论上讲用于培养外植体包含根、茎、叶、果实、子房、花粉、花瓣等多种器官或组织。但外植体选择通常以幼嫩组织或器官为宜。 2）. 外植体消毒 3）. 愈伤组织诱导过程 起动期 又称为诱导期