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蛋白质浓度的测定 .试验原理 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合， 这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250 的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色， 其最大吸收峰改变为 595nm。考马斯亮蓝G250 —蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋 白质定量测定的高敏感性。 在一定范围内，考马斯亮蓝 G250—蛋白质复合物呈色后，在 595nm下，吸光度与蛋 白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度的测定。 试验设备与试剂 设备：普通离心机，721型分光光度计 试剂：标准蛋白液(100ug/ml) 实验材料 新鲜绿豆芽 实验内容 标准曲线的制备 取9支干净的试管，按表进行编号并加入试剂。 \管 试\ 剂\ 1 (空 白) 2 3 4 5 6 7 8 9 标准蛋白液/ml 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 0.9%nacl/ml 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.2 0 考马斯晃蓝染液/ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 蛋白质含量/(ug/ml) 0 10 20 30 40 50 60 80 100 样品蛋白的测定 (1) 样品蛋白液制备 准确称取2g新鲜绿豆芽胚轴的部分，研磨成匀浆，离心分离 (4000r/min,10min )。取上清液用 0.9%nacl 定容到 10ml。 (2) 含量测定 另取两只干净的试管， 加入样品液0.1ml, 0.9mlnacl和考马斯亮蓝染液 4.0ml, 混匀。室温静置 3min,与波长595nm处比色，读取吸光度。 实验结果 1.标准曲线 结果如表所示，并以吸光度为纵坐标，个标准液含量为横坐标做标准曲线。 试管号 1 2 3 4 5 6 7 89 9 蛋白质 含量 60 80 100 A595 0.000 0.069 0.089 0.226 0.339 0.400 0.470 0.570 0.730 标准曲线 =0.0075X - 0.0023 =0.0075X - 0.0023 R2 = 0.9846 ? A595 —线性（A595） 50 100 蛋白质含量 150 2.样品蛋白含量的测定 样品蛋白的比色结果如表，根据直线方程求出每支试管中蛋白质含量。 试管号 10 11 A595 0.186 0.179 蛋白质含量 25.15 24.17 根据公式求出样品绿豆芽蛋白质含量 样品蛋白的体枳 X x §蛋白质含量Uo/g鲜重）=§浅关落盘费访段专密：苔瘫辎 §蛋白质含量Uo/g鲜重）=§ 浅关落盘费访段专密：苔瘫辎 也￡特辎帛健说流^潘东漆牌弟泥君 祢取样品的重量 结果与讨论 结果：绿豆芽蛋白质含量=1233.0ug/g 讨论：1试液为混合均与就取样 2.量取溶液时读数有误差 3.读取A值时有读数误差 4.比色杯中的误差