生物制药论述.docVIP

基因工程制药的主要步骤。 基因工程制药的主要步骤：切，接，转，增，检。 1切：从供体细胞中分离出基因组DNA，用限制性核酸内切酶分别将外源DNA和载体分子切开 2接：用DNA连接酶将含有目的基因的DNA片段接到载体分子上，形成重组的DNA分子 3转：将人工重组的DNA分子导入它们能够正常复制的受体（宿主）细胞中 4增：短期时间培养转化细胞，以扩增DNA重组分子或使其整合到宿主细胞的基因组中 5检：筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞 6将基因工程菌发酵，收获有目的蛋白的发酵液，采用一系列分离纯化手段从发酵液中获得高纯度的目的产物 7对目的蛋白进行过滤除菌，对某些要求更为严格的药物，还需要除热源等处理 8对目的蛋白进行制剂研究，并进行半成品或成品检测，检测合格和进行包装 举例说明三种获取目的基因的方法。 直接方法 1密度梯度离心法2单链酶法3分子杂交法4鸟枪法 （二）以mRNA反转录合成 （三）化学合成法 （四）聚合酶链反应法 重组阳性克隆筛选与鉴定的方法。 1根据重组子遗传重组表型改变的筛选法 利用抗生素抗性基因进行筛选 通过子一互补使菌产生颜色来筛选 利用报告基因筛选克隆子 2根据重组子结构特征的筛选方法 琼脂糖凝胶电泳法 限制性内切酶分析法 印记杂交法 PCR法 DNA序列分析法 3根据目的基因表达产物采用免疫化学方法筛选