台盼蓝染色实验原理和步骤.pdfVIP

台盼蓝染色实验原理 台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整 性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细 胞会被染成淡蓝色。分子式：C H N O S Na ，分子量: 960.82，可 34 24 6 14 4 4 溶于水（10mg/ml)。 实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之 不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透 性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可 认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地 区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞 鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染 色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细 胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需 3-5 分钟即可完成， 并且操作非常简单。 实验步骤： 1、配制4%台盼蓝母液：称取4g 台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双 蒸水至 100ml，用滤纸过滤，4℃保存。使用时用 PBS 稀释至 0.4 %。 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。