革兰染色标准操作程序.docVIP

革兰染色标准操作程序 【操作规程】 涂片 取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴待检样品， 无菌状态下将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高出微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 固定 固定常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处层尽快地来回通过2～3次，共2～3s，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉烫为宜（不超过60度），放置待冷后，进行染色。 初染 在涂片薄膜上滴加龙胆紫1～2滴使染色液覆盖涂片，染色约10s。 水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 媒染 在涂片薄膜上滴加碘溶液，使染色液覆盖图片，染色约10s。 水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 脱色 斜置载玻片，滴加脱色液脱色，至流出的脱色液不显紫色为止，需时20～30s，随即水洗。 复染 在涂片薄膜上滴加沙黄染液1～2滴，使染色液覆盖涂片，染色10s。 水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 干燥、观察 用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后加一滴侵油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及染色，紫色的是革兰阳性菌，红色的是革兰阴性菌。 【注意事项】革兰染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为革兰阴性菌，如脱色时间过短，革兰阴性菌也可被脱色而被误认为革兰阳性菌。因此必须把握脱色时间。 革兰染色检验记录 记录编号： 样本编码 送样日期 染色液厂家 染色液批号 镜检结果 □革兰阳性菌 □革兰阴性菌 □革兰阳性菌+革兰阴性菌 □未发现革兰阴性菌或阳性菌 检验结论 □合格 □不合格 检验人 检验日期 复核人 复核日期