2011.3.11诊断学（课件）血液常规检查.pptVIP

 (三)蛇毒因子溶血试验 以眼镜蛇毒中提取的一种分子量为144000蛋白质，它能直接激活血清中的补体C3，通过旁路途经激活补体系统，进攻PNH红细胞，造成溶血。是特异性PNH试验。  二、红细胞膜缺陷的检测 （一）红细胞渗透脆性试验 [原理] ：红细胞在低渗氯化钠溶液中细胞逐渐膨胀甚至破裂而溶血。是测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗力。 [参考值]开始溶血 ：0.42%~ 0.46% (4.2~4.6g/L) NaCl溶液 完全溶血 ：0.28%~ 0.34% (2.8~3.4g/L) NaCl溶液  [临床意义] 1.脆性增高：主要见于遗传性球型细胞增多症。温抗体型 自身免疫性溶血性贫血、遗传性椭圆形细胞增多症也可增高。 2.脆性减低：常见于海洋性贫血， 也可见于缺铁性贫血、某些肝硬化及阻塞性黄疸等。  （二）红细胞孵育渗透脆性试验 [原理] 红细胞孵育过程中，葡萄糖的消耗增加，储备的ATP减少，导致红细胞膜对阳离子的主动传递受阻，钠离子在红细胞内集聚，细胞膨胀，渗透脆性增加。 [参考值]未孵育 ： 50%溶血 4.00~4.45g/L NaCl 37℃孵育24小时 ： 50%溶血 4.65~5.9g/L NaCl  [临床意义]常用于轻型遗传性球型细胞增多症、遗传性非球型细胞溶血性贫血的诊断和鉴别诊断。 1.脆性增高：主要见于遗传性球型细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、遗传性非球型细胞溶血性贫血。 2.脆性减低：见于珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术。  （二）自身溶血试验及纠正试验 [原理] 先天性非球形细胞性溶血性贫血病人，由于红细胞内酶缺陷葡萄糖酵解障碍，不能提供ATP，以维持红细胞内的钠泵作用。病人红细胞无菌条件下在自身血浆中温育48小时，使ATP储备减少，钠泵作用减弱，导致溶血增加。在孵育过程中，分别加入葡萄糖和ATP作为纠正物，并以氯化钠溶液为对照，观察溶血是否被纠正。  [参考值]正常人红细胞经孵育48小时后，尽轻微溶血、溶血度3.5% ；加葡萄糖和ATP孵育，溶血明显纠正，溶血度1% 。 [临床意义]可用作遗传性球形红细胞增多症和先天性非球形细胞性溶血性贫血的鉴别诊断。  三、红细胞酶缺陷的检测 红细胞酶缺陷所致溶血性贫血又称红细胞酶病，是指参与红细胞代谢的酶由于基因缺陷，导致活性改变而发生溶血的一组疾病。  （一）高铁血红蛋白还原试验 [原理]在有足够量的NADPH存在下，反应液中高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还原成（亚铁）血红蛋白。当葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量正常时，有磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH的数量足已完成上述反应。反之，则还原速度慢，甚至不能还原。  [参考值]高铁血红蛋白还原率75% 0.3-1.3g/L高铁血红蛋白 [临床意义] 减低：蚕豆病 伯氨喹啉型药物溶血性贫血  （二）氰化物-抗坏血酸试验 [原理]抗坏血酸钠与HbO2反应生成H2O2，氰化钠能抑制过氧化氢酶以使H2O2不受益影响，从而使H2O2与还原型谷胱甘肽(GSH)发生反应，产生氧化型谷胱甘肽(GSSG),后者需要NADPH使其在还原为GSH。  如红细胞中催化NADPH形成的酶(如G6PD)缺乏，则GSH产生减少，使H2O2蓄积，HbO2被氧化成为棕色的高铁血红蛋白。如红细胞不缺乏G-6-PD则GSH活性正常，H2O2即被还原失败，HbO2仍呈鲜红色。 [临床意义] 纯合子G-6-PD缺乏的血液在2h内即变色，杂合子者3~4h变色。正常血液需更长时间才变色。  （三）变性珠蛋白小体生成试验 [原理] G-6-PD缺乏可致红细胞内的还原型谷胱甘肽减少，随之出现高铁血红蛋白增高，最后形成变性珠蛋白小体 。取G-6-PD缺陷者血液，然后加乙酰苯肼于被检血样及对照标本中，37℃温育2～4h，推薄血片，用1%煌焦油蓝染色。计算含5个或更多珠蛋白小体的红细胞百分率。 [参考值] 30% [临床意义] G-6-PD缺乏症，不稳定Hb、HbH病等常高于45% 。 （四）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定 [原理] 在G-6-PD和NADP存在下，G-6-PD能使NADP还原成NADPH，后者在紫外线照射下会发出荧光。NADPH的吸收峰在波长340nm处，可通过单位时