临床微生物学检验：实验6.pptVIP

1. 涂片干燥： 在载玻片中央滴加生理盐水一滴，用牙签取自己的牙垢少许与生理盐水混匀做涂片，干燥 2.固定：滴加固定液，固定1分钟后，水洗。 3.媒染：滴加媒染液，加热至冒蒸汽状态维持30S，水洗。 3.银染：滴加硝酸银染液，微加温，染色约30S，水洗，自然干燥后镜检。 Fontana 镀银染色法 Fontana 镀银染色 （1）固定液：冰醋酸1ml，甲醛2ml，蒸馏水100ml。 （2）媒染液：鞣酸5g，石炭酸1g，蒸馏水100ml。 （3）硝酸银溶液：硝酸银5g，蒸馏水100ml。 （4）用前取银溶液20ml，逐滴加入100g/L氢氧化铵，至产生棕色沉淀，轻摇后溶解，微呈乳白色。 结果观察 螺旋体染成棕褐色/黑褐色。 将梅毒螺旋体Nichols株的菌体成分包被在人工载体明胶粒子上 致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体抗体结合发生凝集反应，检测样品中的梅毒螺旋体抗体。 用于梅毒初筛试验阳性标本的确证试验灵敏度高、特异性高 螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验（TPPA）原理 明胶颗粒凝集试验反应原理 加样品稀释液：第1孔至第8孔 …8 加25ul待检样本到第1孔 …8 稀释样品：第1孔至第8孔 …8 加入未致敏颗粒到第3孔,加入致敏颗粒从第4孔至第8孔 …… …8 加样品稀释液：第1孔至第8孔 …8 加25ul待检样本到第1孔 …8 稀释样品：第1孔至第8孔 …8 加入未致敏颗粒到第3孔,加入致敏颗粒从第4孔至第8孔 …… …8 5. 混匀，加盖，静置孵育2小时 5. 混匀，加盖，静置孵育2小时 6. 结果观察 阳性：出现明胶颗粒凝集（++以上） 阴性：不出现凝集 － ± ＋ ＋＋ 　１　　　２　　　　３　　　　４　　　　５　　　　６　　　　７　　　８ 最终稀释倍数　 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 - 粒子成纽扣状聚集,呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形 -/+ 粒子形成小环状,呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形 + 粒子环形明显变大,其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围 ++ 产生均一的凝集,凝集粒子在底部整体上呈膜状延展 ++ 注意事项 所有的样品、试剂及对照品 均应作为感染性物品处理 实验前应将试剂放置室温30分钟以上，并充分摇匀 明胶颗粒专用滴管不能混用，不能用来稀释血清 每次实验都需要做阳性质控 微量反应板中的内容物充分混合后再静置。反应静置过程 中，一定要对微量反应板加盖并禁止振摇 判定结果为“可疑”时，使用其他的检查方法（FTA-ABS法等） TRUST试验原理 甲苯胺红不加热血清试验是采用VDRL抗原重悬于甲苯胺红溶液中,以检测血清中或血浆中的反应素 作为梅毒病人的初筛诊断和疗效之参考 特异性低，操作简单、方便经济 操作方法 旋转摇动卡片8min， 速度约100转/min， 肉眼观察结果 取待检血清、阳性控制血清、阴性控制血清各50μl，加入卡片的圆圈内，并扩散到整个圈内 用专用滴管垂直滴加1滴TRUST试剂在血清上。 结果判定 阴性：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物 阳性：可见大小不同的红色凝聚物 ＋ － 结果判定 定性试验呈阳性的标本，可在白色卡片上将血清作1:2～1:32等5个稀释度，按定性试验方法再做半定量试验。 以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价 注意事项 试剂用前摇匀 滴加试剂时要垂直滴加 摇动时间为8min TPPA 结果解释 ＋ － TRUST假阳性 ＋ ＋ 现症梅毒 － ＋ TRUST － － 排除梅毒感染 极早期梅毒 极晚期梅毒 AIDS病人合并梅毒感染 梅毒血清学试验结果解释 谢谢！ * 分枝杆菌与抗酸染色 卡介苗、抗酸染色液、玻片，等 1.掌握抗酸染色的原理、方法和结果判断。 2.掌握结核分枝杆菌的形态。 目的要求 试剂和器材 细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸 ，一般不易着色，如果经加温或延长染色时间而着色，一旦着色，能抵抗强脱色剂盐酸酒精的脱色，所以又称抗酸杆菌。 抗酸染色原理 涂片、干燥、紫外杀菌、固定 1.初染： 石炭酸复红溶液 加热至冒白烟 5min 2.媒染： 3%盐酸酒精溶液 3min 3.复染：碱性美蓝溶液 1min 结果观察 结核分枝杆菌的形态 抗酸染色阳性 蓝色背景下菌体红色。 菌体细长略弯曲 有时可见分枝，呈单、成堆或成束排