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细胞死亡检测和生物学意义;概述;概述;细胞凋亡Apoptosis;细胞凋亡概念的形成;细胞凋亡概念的形成;细胞凋亡的概念;一、细胞凋亡的形态学特征;一、细胞凋亡的形态学特征;一、细胞凋亡的形态学特征;;细胞坏死的形态学特征; 细 胞 凋 亡 细 胞 坏 死 1.单个细胞丢失 细胞成群丢失 2.细胞膜发泡但仍完整 细胞膜不完整 3.细胞膜内陷将细胞 细胞肿胀、溶解 分割成凋亡小体 4.不发生炎症反应 发生严重炎症反应 5.被邻近正常细胞 被巨噬细胞所吞噬 或吞噬细胞所吞噬 6.溶酶体完整 溶酶体裂解 7.染色质均一凝集 染色质聚集成块、不均一? ;A 坏死细胞;3. SEM of a necrotic cell. Numerous lesions appear on the cell surface. ;二、细胞凋亡的生物化学特征;三、细胞凋亡的关键调控分子 ;三、细胞凋亡的关键调控分子 ;三、细胞凋亡的关键调控分子 ;caspase家族;哺乳动物中15种同源分子，其中7种参与细胞凋亡过程。根据其激活 方式及在细胞凋亡信号传递中的作用，分为： 凋亡起始酶（initiator caspase）：;caspase家族;caspase家族;caspase的活化;同源活化（homo-activation）/自身活化（self-activation）：起始酶（initiators）的活化 起始酶含有较长的原结构域，对其活性有抑制作用 通过DED、CARD结构域与其它蛋白质相互作用形成二聚体/寡聚体而恢复酶活性;caspase的活化;异源活化（hetero-activation）：活化的起始酶催化水解效应酶 将凋亡信号级联放大 caspase cascade ;caspase的效应机制;caspase的效应机制;caspase的效应机制;caspase的效应机制;Bcl-2（B cell leukemia 2） 是一种原癌基因； 定位于线粒体外膜，可与胞质蛋白或同时锚定在线粒体外膜的该家族的其它蛋白相互作用； 促进细胞存活（survival），抑制细胞凋亡，而不是促进细胞增殖（proliferation）。 ;所有Bcl-2家族成员均含有1～4个保守的BCL-2同源结构域（BCL-2 homologue, BH），称为BH1 ～ BH4。 根据对细胞凋亡调节功能的不同，将Bcl-2家族成员分为两类： 抗凋亡的负调节因子； 促进细胞凋亡的正调节因子;Bcl-2家族的分类，Tait and Green, 2010;Bcl-2亚家族： Bcl-2、 Bcl-xl、 Bcl-w、Mcl-1、A1，具有BH1、BH2、BH3和BH4四个结构域。定位于线粒体外膜，抑制细胞凋亡 Bax亚家族：Bax、Bak、Bok，具有BH1、BH2、BH3三个结构域，促进细胞凋亡的效应分子。需转位到线粒体外膜 BH3亚家族：Bad、Bid、Bik、Blk、Hrk、BNIP3、Biml，仅有BH3结构域，通过与抗凋亡的核心分子结合，而释放BAX、BAK等，从而促进细胞凋亡 ;四、细胞凋亡的信号通路;死亡受体（ Death Receptor）;死亡受体（ Death Receptor）;Fas介导的细胞凋亡信号传递途径;死亡诱导信号复合体（ DISC）;HIV 介导的细胞凋亡;2. 细胞凋亡的内在途径（ intrinsic pathway）/线粒体通路 /应激通路 射线、化学物质等造成DNA损伤，氧化应激、内质网未折叠蛋白累积等应激因素，通过调控Bcl-2家族的凋亡调节蛋白，导致线粒体膜通透化，使线粒体释放一些细胞凋亡相关分子，并启动细胞凋亡的级联反应，引发细胞凋亡过程。;BAX、BAK的活化是线粒体膜通透化的关键， BH3亚家族蛋白被诱导表达或激活后，可与BCL-2家族的抗凋亡核心蛋白质结合，从而解放出BAX、BAK，或者通过直接作用于BAX、BAK，调控其活化，使其寡聚化，形成蛋白质孔道，引起线粒体膜通透化，促进细胞色素Ｃ（CytC）的释放，激活caspase cascade，促进凋亡。;细胞凋亡的内在途径;细胞凋亡的内在途径;细胞凋亡的内在途径;细胞凋亡的内在途径;五、凋亡细胞的检测;五、凋亡细胞的检测;五、凋亡细胞的检测;Ca+;FITC-Annexin-V-Fluorescence;五、凋亡细胞的检测;五、凋亡细胞的检测;caspase活性的检测;六、 细胞凋亡的生物学意义; 个体发育过程中，清除机体内不需要的结构;