食用菌技术 食用菌的菌种生产 第二章、食用菌菌种生产.ppt

一支试管可以扩繁 为20－30支试管 1．概念 一级菌种是第一次用孢子分离法、组织分离法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转管扩大后的菌丝体。 2．用途及要求 一级菌种是菌种生产的基础，一级菌种质量的优劣，直接关系到二级菌种和三级菌种的质量，对食用菌生产产生根本的影响。 3、制种过程：主要包括下列几个程序： 培养基的配制?培养基的灭菌?菌种的分离?纯化（提纯）?转管扩大?培养?一级菌种 转管 过程 取直径3-5mm的母种块移入新斜面中部 转管 目的 扩大繁殖，增加母种数量，以满足生产需要 注意 种块勿太大 原老种块勿再接入 传代次数勿太多 母种 培养 设备 注意 条件 经常检查，及时剔除污染管 控制菌龄（即将长满斜面） 外观检查：菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快则质量好，否则质量差 电热恒温培养箱 25℃左右、干净、干燥、黑暗、通风 六、二、三级菌种制作 配制培养基 灭 菌 二级菌种 培 养 接 种 培 养 接 种 灭 菌 配制培养基 三级菌种 一级菌种 二级菌种 （一）制作流程 (二、三级菌种制作过程大同小异) 一支试管可以 扩繁为五瓶原种 概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作 接种 接种环境消毒灭菌 酒精棉球消毒双手 操作器具消毒灭菌 开启的管口、瓶口靠近灯焰 拔出的棉塞勿触及任何地方 动作快、准、稳 无菌 操作 要点 接种方法 二级种 三级种 用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上 用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋中或瓶中料面上 注意：1、严格挑选待接的菌种质量； 2、勿接入表面老菌丝及老种块。 菌种的培养实际就是对菌丝体的培养 培养条件 场所清洁 空气清新 光线暗 温度约25℃ 空气湿度60%~70% 培养条件 勿堆放过挤 及时剔除污染瓶（袋） 栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧 控制菌龄（菌丝长满7-01天后使用） 一瓶原种可以接 30－40瓶栽培种 一、菌种分离的概念 菌种分离：用无菌操作的方法将所需要的食用菌从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。 通过菌种分离得到的纯菌丝体即为一级菌种。 ?二、菌种分离的关键——无菌操作 无菌操作：任何一个操作过程都要注意避免把其它任何无关的菌体带入到培养基中。 注意二点：1．严格树立无菌观念； 2．严格遵循无菌操作规程。 三、菌种分离的方法（常用三种） 组织分离法 将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法 简单易行 保持原菌种性状 适用于大型肉质子实体 重复多易退化 种菇选择→种菇消毒→切取组织块→移接组织块至斜面中央→培养 特点 概念 操作过程（以伞菌为例） 操作示范 选种菇 外观典型、大小适中、无病虫害、八成熟、第1~2茬的子实体 取组 织块 取组织块：纵剖（撕）菇体，在柄盖交界处取绿豆粒大的组织 种菇 消毒 用75%的酒精棉球擦拭子实体 接组 织块 培养 移接至斜面中部 25℃培养箱 孢子分离法 多个孢子萌发后自由交配获得纯菌种的方法 多孢分离 单孢分离 单个孢子萌发获得纯菌种的方法 整菇插种法钩悬法孢子印法 平板稀释法连续稀释法毛细血管法 基内菌丝分离法 概念 特点 适用范围 从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法 易感染杂菌 子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种 子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难 混合菌丝培养类型，如银耳，多采用此法 返回本节 1.培养基配方 1）木屑培养基：阔叶树锯末78%，米糠或麸皮20%，石膏粉1%，蔗糖1%，加水至含水量50%－60%。 2）棉子壳培养基：谷粒（玉米、麦粒等）1000克，石膏粉13克，碳酸钙4克。 2.培养基制作 称重 拌料　 装袋 灭菌　 栽培种的装袋 返回本节 一、消毒与灭菌的概念 消毒：用物理或化学的方法，杀死物料中、物体表面及环境中的一部分微生物，即一般以杀死有害微生物为目的，而不能杀死微生物的休眠体（细菌芽孢）。 灭菌：用物理或化学的方法杀灭或除掉物料或设备中所有的有生命的有机体。 1、常用的灭菌方法 火焰灭菌 用于金属器具，火焰灼烧至红（在火焰2/3处烧） 干燥箱灭菌 用于玻璃器皿（培养皿、试管、三角瓶、吸管）等。洗净?晾干?包装?放入干燥箱?升温?160～170℃，保持1～2h ?关闭电源，自然降温?60℃以下打开干燥箱?取出灭菌物品，尽快使用。 干热灭菌 湿热灭菌 常压灭菌 间歇灭菌 第一次蒸，100℃保持1 h ?28-37℃下培养24 h ?第二次蒸，100℃，保持1 h ?培养2