核酸探针描述演示教学.pptVIP

核酸探针描述;第一节 核酸探针杂交的基本理论一、变性与复性 ; DNA的变性(denaturation)：;4;解链温度（融解温度，Tm）(melting temperature)：;6;增色效应： DNA变性后对260nm紫外光收增加的现象。;DNA的复性（renaturation)：;9;减色效应： 变性DNA复性后对260nm紫外光吸收减少的现象。;1. 常用的变性方法： ;2. 影响复性的因素 ;核酸杂交：不同来源的两条核酸单链由于具有互补序列，在一起复性时，互补序列配对，形成杂化分子。;14;15;二、影响杂交的因素 ; 4. 杂交液中的甲酰胺 甲酰胺能降低核酸杂交的Tm， 含30%—50%甲酰胺的杂交溶液温度能降低到30—42℃。 使用甲酰胺的优点：;注意：;5. 核酸分子的复杂性直接影响复性几率。;第二节 核酸探针 ;1. 基因组DNA探针;2. cDNA探针（complementary DNA） ;3. RNA探针：检测DNA和mRNA ;4. 寡核苷酸探针 ;三、探针设计原则： ;四、探针标记物的选择 ;（一）常用的放射性标记物 ;2. 特性： ①检测特异性强；;3. 探针标记的方法 ;30;②随机引物法（random priming） 人工合成的6~8个核苷酸长的各种不同排列顺序的混合物，它们可以随机地互补到DNA探针的某一处