微生物育种技术 项目一 种子的制备过程、单元八 工业菌种扩大培养技术、微生物育种技术 单元八 项目一.pptVIP

* 细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 摇瓶→种子罐→发酵罐 细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 摇瓶→种子罐→发酵罐 霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27℃,40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（27℃，10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌：生长更慢，采用四级发酵 酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子 一般50t发酵罐多采用三级发酵，有的也采用四级发酵如链霉素生产； * 确定种子罐级数需注意的问题 种子级数越少越好，可简化工艺和控制，减少染菌机会 种子级数太少，接种量小，发酵时间延长，降低发酵罐的生产率，增加染菌机会 虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定。但也与所选用工艺条件有关。如改变种子罐的培养条件，加速了孢子发芽及菌体的繁殖，也可相应地减少种子罐的级数。 用枯草芽孢杆菌生产杆菌肽发酵时种子扩大培养的程序 级数 培养条件 培养时间 1 保藏菌种接种到4 L摇瓶中 18-24 h 2 一级培养物接种到750 L发酵罐中 6 h 3 750 L培养物接种到6000 L发酵罐中 培养到形成最大生物量时 4 6000 L培养物接种到12000 L生产发酵罐中 培养到形成最大生物量时 工业微生物培养法分为静置培养和通气培养两大类型。 静置培养即将培养基盛于发酵容器中，在接种后，不通空气进行培养。 通气培养法的生产菌种以需氧菌和兼性需氧菌居多，它们生长的环境必须供给空气，以维持一定的溶解氧水平，使菌体迅速生长和发酵，又称好气培养法。 种子培养要求一定量的种子，在适宜的培养基中，控制一定的培养条件和培养方法，从而保证种子正常生长。 四、种子培养 表面培养法 固体培养法 液体深层培养 表面培养法是一种静置培养法。 针对容器内培养基物态又分为液态表面培养和固体表面培养。 相对于容器内培养基体积而言，表面积越大，越易促进氧气由气液界面向培养基内传递。 这种方法菌的生长速度与培养基的深度有关，单位体积的表面积越大，生长速度越快。 固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养，统称为曲法培养。起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。最大特点是固体曲的酶活力高。 液体深层种子罐从底部通气，送入的空气由搅拌桨叶分散成微小气泡以促进氧的溶解。该法容易按照生产菌种对于代谢的营养要求一级不同生理时期的通气、搅拌、温度与培养基中氢离子等条件，选择最佳培养条件。 五、种子质量的控制 （二）影响种子质量的因素及控制 培养基 培养条件 种龄 接种量 （1）营养成分适合种子培养的需要 （2）易于被菌体直接吸收和利用； （4）营养成分适当丰富和完全，氮源和维生素含量要高； （5）营养成分要尽可能与发酵培养基相近。 种龄：是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培养时间较为合适。 不同菌种或同一菌种工艺条件不同，种龄是不一样的，一般需经过多种实验来确定。一般细菌的种龄一般为7～24h，霉菌种龄一般为16～50h，放线菌种龄一般为21～64h。 种子培养应选择最适温度，培养过程中通气搅拌的控制很重要。 接种量 接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例 接种量的大小与菌种特性、种子质量和发酵条件等有关。采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。 不同的微生物其发酵的接种量是不同的： 制霉菌素发酵的接种量为0.1％～1％； 肌苷酸发酵接种量为1.5％～2％； 霉菌的发酵接种量一般为10％； 多数抗生素发酵接种量为7％～15％，有时可加大到20％～25％。 （二）种子质量的控制措施 种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。 首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。因此在生产过程中通常进行以下两项检查: （1）菌种稳定性的检查 （2）无（杂菌）检查 （三）种子质量标准 细胞或菌体 生化指标 产物生成量 酶活力 菌体形态可通过显微镜观察来确定。 以单细胞菌体为种子的质量要求菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列和形态。 以霉菌、放线菌为种子的质量要求是菌丝粗壮，对某些染料着色力强、生产旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况良好。 种子液的糖、氮、磷含量的变化和pH值变化 种子应确保无任何杂菌污染。 菌种生长缓慢或过快 菌丝结团 菌丝粘壁 （五）种子异常的分析 与孢子质量和种子罐的培养条件有关。 生产中通入种子罐的无菌空气温度较低