毕赤酵母产木聚糖酶实验方案(最终).docx

重组毕赤酵母产木聚糖酶摇瓶培养实验 一、 实验目的 熟练摇瓶发酵的操作流程和无菌操作技术。 掌握细胞浓度、产物浓度的表征和测定方法。 熟悉测定生长曲线和产物生成曲线的方法。 二、 毕赤酵母简介 甲醇营养型毕赤酵母 (Pichia pastoris) 表达系统是 80 年代初被开发和研制的一 种新型酵母表达系统。40年前，Ogata等人首次发现有些酵母 能够利用甲醇作为唯一 的碳源和能源进行生长 。随后，甲醇营养酵母作为 潜在的单细胞蛋白 (single cell protein, SCP) 来源立即引起广泛关注，最初将其作为高蛋白的动物饲料在市场上销 售。在20世纪70年代，Phillips Petroleum公司开发出毕赤酵母利用甲醇生长的培养 基、发酵操作手册和高密度连续培养生产工艺 。 70 年代的石油危机导致了甲烷价格 的急剧上升， 与此同时， 动物饲料蛋白的主要替代源——大豆价格的下降， 导致利用 甲醇生产 SCP 在经济上已不再合适。 在以后的 10 年中， PhiLLips PetroLeum 公司与 SIBIA 公司合作开发利用 毕赤酵母作为生物体表达外源蛋白 的研究，研究人员 分离了 醇氧化酶 (alcohol oxidase, AOX) 的基因和启动子，构建了表达载体和菌株，开发了 毕赤酵母基因操作相关技术 。成熟的 SCP 发酵方法的开发，加上醇氧化酶强启动子