分子生物学实验步骤总结超全（精品完整版）.docxVIP

一目的基因的获得 细菌基因组DNA勺提取 （一） 仪器 1） 台式高速离心机 2） 恒温水浴箱 3） 枪式移液器 4） 灭菌的EP管和Tip头 （二） 试剂 1）溶液1: 25% 蔗糖 50 mmol/L Tris-Hcl，pH8.0 50 mmol/L EDTA，pH8.0 500 ug/ml 溶菌酶（现用现配） 100ug/ml RNase 2）溶液U: 100mmol/L Tris-Hcl，pH8.0 1% SDS 400ug/ml 蛋白酶K 3） 酚：氯仿：异戊醇（25： 24： 1） 4） 氯仿：异戊醇（24： 1） 5） 3mol/L NaAc（pH5.2） 6） 异丙醇或无水乙醇 7） 70%乙醇 8） TE缓冲液：10mmol/L Tris-Hcl，pH8.0 1mmol/L EDTA，pH8.0 （三）实验步骤 1） 5 mL细菌过夜培养，5000rpm离心10分钟，去上清液。 2） 将菌体细胞悬于250uL溶液1中，37°C水浴保温过夜。 3） 加250uL溶液U, 55° C水浴保温4小时。 4） 加0.9倍体积的酚/氯仿/异戊醇（25： 24： 1）,轻轻混匀，于14000rpm离心10分钟，转 移水相至新的Ep管，重复步骤4一次。 5） 向转移的水相中加入0,9倍体积的氯仿/异戊醇（24： 1），轻轻混匀，于14000rpm离心10 分钟，转移水相至新的E