氮蓝四唑(NBT)法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力（精品完整版）(001).docxVIP

氮蓝四唑 (NBT) 法测定超氧化物歧化酶活力 、原理 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase，SOD) 普遍存在于动 ?植物体内， 是一种清除超氧阴离 子自由基 ??2- 的酶，它催化下列反应： 2?? + 2?? t H2O2 + ?? 本反应产物 H2O2 可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。本实验依据超氧化物歧 化酶抑制氮蓝四唑 (NBT) 在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄 素可被光还原， 被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基， 超氧阴 离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙， 后者在 560nm 处有最大吸收。 而 SOD 可清除 超氧阴离子自由基， 从而抑制了甲腙的形成。 于是光还原反应后， 反应液蓝色愈深，说明酶 活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小 ? 二、材料、仪器设备及试剂 材料 海滨锦葵叶片 ? 仪器设备 高速台式离心机，分光光度计，微量进样器，荧光灯 (反应试管处照度为 4000lx) ，试管或指 形管数支 ? 试剂 0.05mol/L 磷酸缓冲液 (pH7.8)? 130mmol/L 甲硫氨酸 (Met) 溶液称 1.9399gMet 用磷酸缓冲液定容至 100ml ? ⑶750 mol/L氮蓝四唑溶液称取 0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至 100ml，避光保