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生物分离工程沉淀分离法;问 题;离心法与过滤法的比较; 离心分离原理 ; 离心技术分类;二、沉淀分离法 ;2、类型;沉淀法操作步骤
在经过滤或离心后的样品中加入沉析剂;
沉淀物的陈化,促进晶体生长;
离心或过滤,收集沉淀物;;沉淀法的优点:
设备简单、成本低、原材料易得、便于小批量生产,在产物浓度愈高的溶液中沉淀越有利,收率越高;
沉淀法的缺点:
所得沉淀物可能聚集有多种物质,或含有大量的盐类,或包裹着溶剂,所以沉淀法所得的产品纯度通常都比结晶法低,过滤也???困难。 应用沉淀技术分离生化产物的典型例子是蛋白质(酶)的分离提取,无论是实验室规模还是工业生产,沉淀法都得到了普遍应用,工业上利用蛋白质溶解度之间的差异从天然原料如血浆、微生物抽提液、植物浸出液和基因重组菌中分离蛋白质混合物已有50多年的历史了。;沉淀法分离蛋白质的特点有:
1 在生产的前期就可使原料液体积很快地减小10~50倍,,从而简化生产工艺、降低生产费用;
2 使中间产物保持在一个中性温和的环境;
3 可及早地将目标蛋白从其与蛋白水解酶混合的溶液中分离出来、避免蛋白质的降解,提高产物稳定性;
4 用蛋白质沉淀法作为色谱分离的前处理技术,可使色谱分离使用的限制因素降到最低。;(二)盐析沉淀法 ;2.盐析原理;蛋白质溶液的稳定性;盐析示意图;3.盐析过程;离子强度对盐析过程的影响;β和Ks的物理意义;经验方程的图示;在一定的pH值及温度条件下,改变盐的浓度(即离子强度)达到沉淀的目的,称为“Ks” 分级盐析法。
(Ks盐析:固定pH ,温度,改变盐浓度)
2.在一定的离子强度下,改变溶液的pH值及温度,达到沉淀的目的,称为“β”分级盐折法。
( β盐析:固定离子浓度,改变pH ,温度)
由于蛋白质对离子强度的变化非常敏感,易产生共沉淀现象,因此常用于提取液的前处理。一般粗提蛋白时常用第1种方法,进一步分离纯化时常用第2种方法。;4、盐析剂的选择;阴阳离子盐析效果;5、影响盐析的因素;6、盐析沉淀法的特点 ;(三)有机溶剂沉淀法 ;有机溶剂中的蛋白质沉淀;3、有机溶剂的选择;常用的有机溶剂沉析剂;4.有机溶剂沉淀的特点;温度:低温有利于防止溶质变性;有利于提高收率(溶解度下降);一般在0℃以下,操作时在冰盐浴中进行。
搅拌速度:散热
溶液pH值:通常选在等电点附近
离子强度:离子强度低有利于沉析,盐浓度一般在0.01~0.05mol/L
生物样品浓度: 蛋白质溶液的起始浓度0.5~2%,粘多糖起始浓度1~2%为宜。
稀:溶剂用量大,回收率低,但共沉淀作用小
浓:节省溶剂用量,共沉作用强,分辨率低
金属离子的助沉析作用:Zn2+、Ca2+;(四)等电点沉淀法;4、特点;(五)高分子聚合物沉淀法;PEG沉淀法机理: PEG分子亲水性强,优先水合,使得蛋白质等从溶剂中析出.
优点
1 体系的温度只需控制在室温条件下;
2 沉淀的颗粒往往比较大,同其他方法相比,产物比较容易收集;
3 PEG非但不会使蛋白质变性而且可以提高它的稳定性,
缺点
PEG比其他沉淀剂更难从蛋白质溶液中除去,为此需用超滤和液-液萃取来解决。
广泛应用于核酸、酶的分离;3、特点;(六)金属离子沉淀法;3、特点;(七)选择性变性沉淀法;选择性变性的方法;思考题;此课件下载可自行编辑修改,仅供参考!感谢您的支持,我们努力做得更好!谢谢
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