实验1 动物组织总RNA的制备及检测.docVIP

实验1 动物组织总RNA的制备及检测 实验目的： 使学生掌握从动物新鲜组织，采用Trizol抽提法制备总RNA的实验技术，以及用紫外分光光度法检测RNA的纯度及定量、用琼脂糖电泳法检测RNA的完整性及质量。 实验原理： Trizol是一种新型的总RNA即用型制备试剂，适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA。Trizol内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。Trizol，在样品裂解或匀浆过程中，TRIzol能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。Trizol。 ?????Trizol试剂可用于小量样品（50~100mg组织、5×106细胞），也可用于大量样品（≥1g组织或≥107个细胞），对人、动物、植物和细菌、血液提取都适用，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染，可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保护分析等。 实验材料： 1、 器械处理 用于RT-PCR的玻璃器皿常规洗净后，在烤箱内180℃干烤10h。 所有塑料器材（如Eppendorf管、Tips吸头、PCR薄壁管）均为新购产品，使用前用0.1% 焦碳酸二乙酯（DEPC）浸泡12h，高压消毒、烘干。 用于提取RNA的氯仿、异丙醇均为新包装。 7