生物步步高二轮第一讲--基因工程和细胞工程复习进程.ppt

生物步步高二轮第一讲--基因工程和细胞工程;↓;转基因植物 转基因动物 基因药物 基因治疗;二、细胞工程 ;3.;4.细胞核移植 过程： 应用：;考点一 基因工程的具体操作流程和应用 1.理解基因工程的工具 （1）工具酶 ①限制性核酸内切酶：只能在特定的部位进行切割，切割位点一般具有反向重复序列。作用结果：形成黏性末端或平末端。作用实质：使特定部位的两核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 ②DNA连接酶作用实质：两类DNA连接酶都是将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ;（2）载体 ①种类：常用的载体是质粒，大肠杆菌、枯草杆菌、 土壤农杆菌等细菌中都有质粒。 ②作为载体应具备的条件 a.对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。 b.具有标记基因，以便于鉴定目的基因是否进入受体 细胞。 c.能自我复制，通过复制进行基因扩增，否则可能会 使重组DNA丢失。 d.具有一个至多个酶切位点， 以便于目的基因的插入。 e.载体DNA分子大小适合，以方便操作。;（2）基因表达载体的构建 ①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端或平末端的切口。 ②用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端或平末端。 ③用DNA连接酶将质粒与目的基因重新连接形成重组质粒。;（4）目的基因的检测与鉴定 ;特别提醒 目的基因的检测也可利用质粒中的标记基因，如大肠杆菌质粒中含抗青霉素基因，把某种转基因生物放入带有青霉素的培养基中培养。若有抗性，说明导入成功；若无抗性，说明导入失败。 ; 我国科研人员发现，弯曲的蚕丝由于弯折处易断裂，其强度低于由蜘蛛纺绩器拖牵丝的直丝，并首次在世界上通过了转基因方法将“绿色荧光蛋白基因”与“蜘蛛拖牵丝基因”拼接后成功插入蚕丝基因组中，并在受体细胞中成功表达。;（1）在这项“基因工程”的操作中，目的基因是 ，采用绿色荧光蛋白基因的主要目的是 。 （2）两基因组合在导入受体细胞前必须进行的步骤是：将其与由细菌体内取得的 进行切割处理，以保证有相同的 ，并拼接成 。如果引入的受体细胞是细菌，还要对细菌作 处理。 （3）在基因工程中受体常用微生物，为什么？ 。 （4）“蜘蛛拖牵丝基因”成功表达的标志是 。 （5）带有“绿色荧光蛋白基因”的转基因蚕，是否能引起生态安全性问题？请分析原因。 。;解析 从题目提供的信息不难看出，蜘蛛纺绩器拖牵丝的直丝强度比蚕丝要大，所以拖牵丝基因是目的基因，绿色荧光蛋白基因是作为标记基因。在形成重组DNA时，首先要用同一种限制性内切酶切割目的基因和质粒，得到相同的黏性末端，再用DNA连接酶形成重组质粒，如果要将重组质粒导入细菌体内，必须对细菌细胞壁用氯化钙处理，增加其通透性，便于重组质粒进入细菌体内。蜘蛛拖牵丝基因成功表达时，能产生高强度的丝，转基因生物的安全性问题正在探索中。;答案 （1）拖牵丝基因 作为标记（基因） （2）质粒 黏性末端 重组质粒（或重组DNA） CaCl2（或提高膜的通透性） （3）微生物的繁殖速度快 （4）产生高强度的丝 （5）可能。转基因蚕扩散进入自然生态系统，与同种的野生蚕杂交后，使野生蚕也含有转基因，可能会威胁到原有物种，引起生态危机; （08·广东卷）天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题： （1）将淀粉酶基因切割下来所用的工具是 ，用 将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子 ，以完成工程菌的构建。 （2）若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是 ；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用 检测；将该工程菌;接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈，该现象发生的原因是 。;交法来检测特定的蛋白质。淀粉酶可以使淀粉水解，所以加入碘液后培养基中淀粉被水解的区域不会变蓝。 答案 （1）限制酶（限制性核酸内切酶） DNA连接酶 导入受体细胞 （2）DNA分子杂交技术 抗原—抗体杂交或淀粉酶活性 该工程菌产生的淀粉酶可分泌至培养基，水解淀粉后的区域，遇碘不再变蓝色，产生透明圈 （3）测定相同培养条件下不同工程菌菌株的淀粉酶活性或酒精产量 （