专业实验iii临床免疫检验.docxVIP

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可能作为名词解释来考的以红色标注 抗血清的制备 【原理】:用抗原刺激机体可以产生抗体,抗原的性质、纯度和活性影响其免疫动物后获得 的抗体的的特异性和效价。 在体外有目的的制备抗原, 经初次、 再次免疫的过程可以获得高 质量的抗体。 【注意事项】 制备佐剂时,一定要顺着同一方向用劲磨。 检查油包水的方法:培养皿内加水,滴入混匀液,不散开即可。如果第 1次检查不合格, 第 2 次检查必须重新倒水在平皿。 免疫动物皮内注射时,可以在足垫、腋下、 背部等处多点注射,总剂量 1ml/只。 凝集反应 颗粒性/可溶性Ag( Ab )与载体颗粒结合成的致敏颗粒,与相应 Ab( Ag )发生特异性反 应。在一定条件下,形成肉眼可见的凝集现象。 一、 直接凝集反应: 颗粒性Ag,与相应Ab直接结合。在一定条件下,形成肉眼可见的凝 集现象。 ( 1 )玻片法凝集反应: 【原理】:颗粒性Ag (细菌、红细胞等)与相应 Ab直接结合,在一定条件下,形成肉眼可 见的凝集现象。 【意义】:①定性试验,可用已知抗体的诊断血清来测未知的抗原。 ②可用于细菌分型、ABO 血型鉴定等。 【结果观察】 : 对照区不发生凝集,为均匀浑浊的乳状液。 试验区, 伤寒菌液 (Ag )与相应的 Ab 发 生反应, 出现肉眼可见的凝集块, 为阳 性。 如 与对照相同则为阴性。 ( 2)试管法凝集反应: 【原理】:用已知细菌作为一定浓度的悬液 Ag,与一系列稀释的受检血清混合, 经静置保温 后观察每管内颗粒性 Ag 的凝集程度。 【结果观察】 : 先看对照管,应无凝集现象,轻摇试管,细菌分散均匀, 混浊。再从第1管开始看。 根据凝集度打“ +”。 —: 管底无沉淀 ,液体混浊,细菌分散均匀。 ++++ : 管底有沉淀 ,上液澄清,细菌全部凝集。 +++: 管底有沉淀 ,液体稍混 , 细菌 1/4 不凝集。 ++: 管底有沉淀 ,液体混浊,细菌 1/2 不凝集 +: 管底仅少量有沉淀 ,液体混浊。 效价判断:以出现“ ++”凝集的最大稀释度,为该血清的凝集效价。 二、 间接凝集反应: 必须借助颗粒性载体,将可溶性 Ag( Ab )致敏载体,成致敏颗粒,再 检测标本中相应的 Ab ( Ag )。 间接凝集反应(胶乳凝集抑制试验) : 【定义】 间接凝集反应: 将可溶性 Ag 挂在一个无 关免疫的载体 (聚苯乙烯胶乳 )上,制备成 颗粒Ag,与其相应的Ab相结合,为间接凝集反应。 以检测尿中HCG为例: 阳性:尿含HCG+抗HCG t +HCG胶乳颗粒 不凝集 阴性:尿不含 HCG+抗HCG t +HCG胶乳颗粒 t 凝集 沉淀反应 【定义】:可溶性Ag +相应Ab t形成肉眼可见的沉淀物质(Ag-Ab复合物) 一、 对流免疫电泳 【原理】:禾U用电场的作用加强和加快双向扩散的一种方法。 在pH8.6的碱性缓冲液琼脂中进行电泳,带有较多负电荷的 Ag泳向阳极,而 Ab球蛋白等 电点偏高(约为6--7),在pH8.6时带负电荷较少,加上分子量较大,泳动慢,受电渗(指 电场中液体对固体支持物的相对移动) 干扰后向阴极倒退, 这样抗原抗体作相对运动, 在较 短时间内即可相遇,在孔间两者分子比例合适的地方形成沉淀线。 【意义】:对流免疫电泳主要用于检测标本中的抗原如 AFP、HBsAg等。本法较双向琼脂 扩散时间大为缩短(一般只需 30分钟到1小时),且灵敏度比双扩高约数十倍。 沉淀线的位置与 Ag、Ab分子电荷情况有关,也与 Ag、Ab比例有关。有沉淀线为阳性, 无沉淀线为阴性。 【特点】 优点:操作简便,观察结果快,敏感度比双扩高 8-16倍。 缺点:分辨率差,当有多种 Ag、Ab系统存在时,形成 的沉淀线位置易重叠,难以分辨, 所以用此目的时,不如双扩。 二、 双向琼脂扩散实验 【原理】:定性试验。将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上相对应的孔内,抗原抗体 从孔内向四周扩散,在两者对应比例适宜处形成沉淀线。 【意义】:可用已知抗原(抗体)来检测未知的抗体(抗原) ,同时检测抗原抗体的纯度。临 床上常用来检测甲胎蛋白(AFP),作为原发性肝癌等的辅助诊断。 【结果判断】: 在阳性对照孔与中间的抗体孔之间出现一条或多条白色沉淀线 (一对抗原抗体系统即可出 现一条沉淀线,如有多对抗原抗体可出现多条沉淀线) 。 观察标本孔与中间的抗体孔之间有无出现沉淀线,有即为阳性,无即为阴性。 以上两实验的注意事项: ①浇琼脂板时注意动作要迅速, 琼脂不要溢出玻片,成品琼脂板平整无气泡,打孔时, 不要 将琼脂 划 破;②加样时,不要溢出孔外;③加样用的枪头不要混用。 三、 免疫电泳 【原理】:区带电泳后进行双相琼脂扩散实验。 将待测标本置于琼脂凝胶中电泳, 样品中各蛋白成分因分子量及电泳迁移率不同, 被分成

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