药物分析新方法与新技术-液相色谱联用技术及其应用-张尊建.pptVIP

液相色谱联用技术及其应用;主 要 内 容; 联用目的 色谱是一种高效的分离手段，可将复杂混合物中的各个组分分离，但其定性能力较差，通常只是利用各组分的保留特性来定性，这在目标物完全未知的情况下是相当困难的。 而随着定性分析和结构分析手段－质谱（MS）、核磁共振光谱(NMR)、红外光谱(IR)以及等离子体发射光谱(ICP-AES)等的发展，确定一个纯组分是什么化合物，其结构如何已是比较容易的事。 色谱联用大大增强了色谱分析的定性能力。; 色谱联用中的“接口”; 常用的色谱联用技术; 3、液相色谱-核磁共振波谱联用 核磁共振波谱（NMR）是有机化合物结构分析的强有力工具，特别是对于同分异构体的分析。但实现色谱和NMR的在线联用是当前色谱联用技术中最困难的，也是目前使用最少的色谱联用技术。 主要原因如下： ① NMR的灵敏度较低，虽然傅立叶变换波谱可以通过信号的累加提高灵敏度，但需要延长信号采集时间，与色谱峰的出峰时间很短矛盾； ② 为使通过样品的磁场均匀，一般采用将样品管在磁场中以较高速度旋转的方法，这也造成色谱和NMR在线联用的困难； ③ NMR在作质子谱时为避免溶剂干扰，含氢溶剂必须使用氘代溶剂。如用氘代溶剂作流动相，分析成本将大大提高；如不用含氢溶剂，在色谱上又很难实现。在作碳谱时，流动相中的13C也将干扰测定。;第二部分 液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术 ;1、直接液体导入接口 直接液体导入（DLI）接口出现于20世纪70年代，但这一技术始终停留在实验室使用阶段，没有真正形成商品化仪器。DLI接口是在真空泵的承载范围内，以细小的液流直接导入质谱仪。 2、移动带技术 移动带（MB）技术早在20世纪70年代中期就已有了最初的设计。所谓移动带是在LC柱后增加了一个移动速度可调整的流出物传送带，柱后流出物滴落在传送带上，经红外线加热除去大部分溶剂后进入真空室。 3、热喷雾接口 出现于20世纪80年代中期，是一个能够与液相色谱在线联机使用的“软”离子化接口，得到了比较广泛的应用。;4、粒子束接口 粒子束接口（PB）是20世纪80年代出现的另一种应用比较广泛的接口，又称为动量分离器。但由于其离子化手段仍为电子轰击，不是“软”离子化方式，因此不太适合热不稳定化合物的分析。 5、快原子轰击 快原子轰击（FAB）是在最初用于无机化合物表面分析的粒子轰击源（FIB）的基础上发展起来的，是20世纪80年代中期发展的一种新型电离源，是一种“软”离子化技术。 6、激光解析离子化和基质辅助激光解析离子化 基质辅助激光解析（MALDI）离子化技术首创于1988年，是在1975年首次应用的激光解析（LD）离子化技术上发展起来的，目前已得到了广泛的接受和应用。;7、电喷雾接口 1984年Fenn等人发表了他们在电喷雾技术方面的研究工作，这一开创性的工作引起了质谱界极大的重视。在其后的十几年中开发出的电喷雾电离及大气压化学电离商品接口是一项非常实用、高效的“软”离子化技术，被人们称为LC-MS技术乃至质谱技术的革命性突破。目前的电喷雾接口已经可安装在四极质谱、磁质谱和飞行时间质谱上。;8、多种电喷雾接口技术 ① 电喷雾电离（ESI） 在喷口与毛细管之间施加数千伏特的高电压，此高电压是起关键作用的离子化条件，ESI接口因此得名。 ② 大气压电离（API） 一般意义上指离子化是在常压下完成的；指接口技术时包括所有在大气压下进行的离子化接口。 ③ 大气压化学电离（APCI） 用于LC-MS的APCI技术与传统的化学电离接口不同，它并不采用诸如甲烷一类的反应气体，而是借助电晕放电启动一系列气相反应以完成离子化过程，就其原理，它也可被称为放电电离或等离子电离。 ④ nano-ESI 它可用于毛细电泳和微径柱HPLC与质谱联用，原因是它具有很低的工作流速。;ESI（电喷雾离子化） 在高静电梯度下，使样品溶液发生静电喷雾，在干燥气流中（近于大气压）形成带电雾滴，随着溶剂的蒸发，通过离