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目 录
摘 要 i
Abstract iii
第一章 绪论 1
1.1 藤壶 2
1.1.1 藤壶的进化地位 2
1.1.2 藤壶的生活周期 5
1.1.3 藤壶生活周期中的多个粘附事件 5
1.2 藤壶胶 6
1.2.1 藤壶胶的体内合成、储存与分泌 6
1.2.2 藤壶粘着界面的形貌与化学特征 9
1.2.3 藤壶胶蛋白的分离与表征 11
1.3 藤壶胶固化机理 16
1.3.1 藤壶胶蛋白在粘着点的空间定位 17
1.3.2 表面粘附：配位和物理相互作用 17
1.3.3 内在粘合：自组装与酶催化交联 19
1.3.4 界面蛋白与内在蛋白互作 22
1.3.5 藤壶胶水下粘附分子模型 23
1.4 本文选题依据及研究内容 24
第二章 基于融合蛋白Trx-Balcp19k 的超强胶粘剂的研究 29
2.1 Balcp19k 的基因克隆与异源表达 29
2.1.1 Balcp19k 的克隆与表达载体的构建 29
2.1.2 重组蛋白的表达与纯化 34
2.2 Trx-Balcp19k gel 超强胶粘剂的发现 35
2.3 Trx-Balcp19k gel 的粘性表征 36
2.3.1 表面涂层分析 36
2.3.2 快速检测Trx-Balcp19k gel 的宏观粘结能力 37
2.3.3 宏观剪切测试 38
2.4 Trx-Balcp19k gel 的生化组成分析 41
2.4.1 SDS检测Trx-Balcp19k gel 的蛋白组分 41
2.4.2 比色法检测Trx-Balcp19k gel 的总糖和总脂含量 42
第 I 页
2.5 Trx-Balcp19k gel 的形成机理分析 44
2.6 Trx-Balcp19k gel 的细胞毒性测试 46
2.7 本章小结 48
第三章 无标签重组Balcp19k 及其Cys 缺失突变体的制备 51
3.1 新融合蛋白Trx-Balcp19k′ 的表达与纯化 51
3.1.1 新重组质粒的构建 51
3.1.2 Trx-Balcp19k′ 的诱导表达 52
3.1.3 结合亲和层析和离子交换层析纯化Trx-Balcp19k′ 53
3.2 肠激酶切割反应 55
3.2.1 Trx-Balcp19k′ 的肠激酶切割反应初试 55
3.2.2 肠激酶切割反应条件的优化 56
3.2.3 利用优化后的条件切割Trx-Balcp19k′ 60
3.3 无标签rBalcp19k 的分离纯化 61
3.3.1 结合亲和层析与离子交换层析分离rBalcp19k 61
3.3.2 结合离子交换层析与RP-HPLC 分离rBalcp19k 63
3.3.3 验证纯化的rBalcp19k 65
3.4 rBalcp19k 的Cys 缺失突变体的制备 67
3.4.1 PCR 定点突变 67
3.4.2 rBalcp19k 突变体的表达与纯化
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