冰冻切片与石蜡切片各自的优劣之处.doc

冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么 1、 从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。 2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构， 并造成抗原的弥散，从而定位不准确。 3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会 对抗原的性质造成影响。 4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。 5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、 染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。 冰冻切片（ frozen section ）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。 编辑本段 冰冻切片的应用 （1）在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。 （2）了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。 3）对于已确定为恶性肿瘤的患者，则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织。 4）在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织。 5）显示组织中的脂肪和脂类物质， 这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。 6）某些酶的显示如 ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。 7）神经病理学技术中的某些染色法如： Eager 氏法，Marchi 氏法，Cajal 氏法， Hortega 氏法和 Holzer 氏法等。 8）对某些物质所进行的免疫荧光的研究。 编辑本段 冰冻切片的制作方法 低温恒冷箱冷冻切片制作法 Shandon As 620 E 型恒温箱冷冻切片机为例，该机的箱面上有电子控制板，装有即时冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器马上进行工作状态， 并可持续 10mins 。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，并可持续 15mins 。有照明键一个，启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。配有消毒键一个，当进行一周的工作或者一天的工作后，启动该键，可对工作间进行消毒。当每天工作完毕时，可启动密锁键，锁住工作间。除此之外，箱面的左边有四个按键，两个为快速自动进退键， 两个为微小进退键，还有一个手动旋钮，调节修组织块时的进退。 冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达 - 60℃左右，冷冻箱的中间为一台切片机，工作间的温度在 0- 30℃间可任意调节，并在箱面上的荧屏显示出来。 操作方法及步骤 ①取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为 24×24×2mm。 ②取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。 ③将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。 ④调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切， 纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在 5～10um 间。 ⑤调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。 ⑥应视不同的组织选择不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，主要根据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋 巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在 -10- - 15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时， 可调在 -15 ～20℃左右， 切带脂肪的组织时， 应调至 - 25℃ 左右， 切含大量的脂肪时