琼脂糖凝胶电泳的操作步骤.docxVIP

琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下： 制备1%琼脂糖凝胶（大胶用70ml,小胶用 50ml）:称取0.7 g（0.5 g） 琼脂糖置于 锥形瓶中 ,加入 70 ml（50ml）1 ×TAE, 瓶口倒扣小烧杯 .微波炉加热煮沸 3 次至琼脂 糖全部融化 ,摇匀 ,即成 1.0%琼脂糖凝胶液 . 胶板制备 :取电泳槽内的有机玻璃内槽 （制胶槽）洗干净,晾干,放入制胶玻璃板 . 取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好 ,形成模子 .将内槽置于水平位置 ,并在 固定位置放好梳子 .将冷却到 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻 璃板上 ,使胶液缓慢展开 ,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层 .室温下静置直至凝 胶完全凝固 ,垂直轻拔梳子 ,取下胶带 ,将凝胶及内槽放入电泳槽中 .添加 1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止 . 加样 :在点样板或 parafilm 上混合 DNA 样品和上样缓冲液 ,上样缓冲液的最终 稀释倍数应不小于 1X.用 10 ul 微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内 , 每加完一个样品 ,应更换一个加样头 ,以防污染 ,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶 面.（注意 :加样前要先记下加样的顺序 ）. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳 ,电压 60-100V, 样品由负极 （黑色）向 正极（红色）方向移动 .电压升高 ,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低 .当溴酚蓝移动 到