AKTA explorer 标准操作及维护保养规程.docVIP

文件编号： AKTA explorer 标准操作及维护保养规程 编制 审核 批准 发布日期： 2017 年 月 日 第 PAGE 2 页 共 NUMPAGES 3 页 第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 1 页 第 PAGE 2 页 共 NUMPAGES 3 页 1 目的 阐明和规范运用AKTAexplorer蛋白纯化系统。 2 范围 本操作规程适用于AKTAexplorer蛋白纯化系统的操作使用及维护保养。 3 职责 仪器操作人员负责仪器的正确使用，清洁及基本维护。仪器负责人负责监督和培训其他人员对仪器的正确使用，同时仪器负责人对仪器进行定期维护和保养。 4 引用 4.1 AKTA_Purifier操作手册 4.2 AKTA_explorer 英文操作手册 5 内容 5.1 准备工作 5.1.1 将预先配置好的缓冲液，用0.45微米滤膜过滤，然后进行超声脱气。 5.1.2 将待分离样品用0.45微米滤膜进行过滤。 5.1.3 将对应的管路放入对应的缓冲液。 5.2 启动层析系统 5.2.1 连接好电源打开AKTAexplorer蛋白纯化系统电源，打开电脑点击操作软件。 5. 2.2 排出缓冲液管路气泡 检查进液管路有无气泡，少量气泡可进行泵洗排气，首先将管路滤头放入超纯水中，点击操作软件“system control”中“manual”操作菜单，然后在“pump”中点击“pump wash explorer”同时选择待要排气的管路，选择完成点击“execute”，泵洗结束点击“end”。当管路中气泡仍未排除时，“manual”操作菜单中点击“flowpath”选择未排尽气泡管路，点击“execute”，用注射器在对应的泵头上方阀门处抽出气泡，点击“end”。 5. 2.3 排除样品泵管路气泡 将进样管路放进超纯水中，“manual”操作菜单中点击“sample flow”设定流速10-20mL/min，“flowpath”中选择管路，“Alarms”设定样品泵压力0.3MPa，点击“execute”排气结束后点击“end”。当管路中气泡仍未排除时，用注射器连接在injection valve V1的2号位抽气。“direct load”设定流速样品才过柱子，在“sample flow”改变流速样品不过柱子。 5.2.4 管路液体置换 将使用的管路放进纯化水中，“manual”操作菜单，然后在“pump”中点击“pump wash explorer” 同时选择管路，选择完成点击“execute”，泵洗结束点击“end”。将管路放到对应的缓 冲液中，置换成相应的缓冲液。 5.2.5 连接层析柱 连接层析柱若是预装填柱，预先设定一个小的流速1-5mL/min，“pump alarm”设定0.3MPa，先接上面不要太紧，再接柱子下端，拧紧柱子接头检查是否漏液 5.3 手动操作纯化样品 5.3.1 平衡层析柱 通常用上样缓冲液平衡5个柱体积，Manual操作菜单中“pump”设定流速，“flowpath”设定柱位、缓冲液进口、缓冲液流向、废液出口F1，“alarm”设定检测波长、泵压，选择完成点击“execute”，平衡结束点击“end”。 5.3.2 上样 样品环上样 上样量较少时选择样品环上样，样品环接到injection valve V1的2号位和6号位，注射器抽取上样缓冲液冲洗上样环，冲洗缓冲液从3号位注入，注射器将样品由3号位注入，Manual操作菜单中“flowpath”“Inject valve”选定“inject”，设置好其他参数，选择完成点击“execute” 上样结束点击“end”。 样品泵上样 上样量较大时选择样品泵上样，Manual操作菜单中“derict load”设定上样流速、上样量大小，“alarm”设定样品泵泵压，“flowpath”选定进样管路、柱位、流向、废液出口，选择完成点击“execute”，上样结束点击“end”。 5.3.3 方法洗脱及样品收集 5.3.3.1 冲洗未结合样品 用起始缓冲液冲洗未结合到层析柱上的样品，同时将未结合样品收集以备最后结果分析。 5..3.2 样品洗脱和收集 Manual操作菜单中设定好流速、柱位、流向、waste出口选择F2(F2与收集器相连)、缓冲液进口、系统泵压力（通常0.3MPa）、检测波长。在“pump”中设定“gradient target B 100%”的各项参数