养殖水环境化学实验：模块五.pptVIP

* 实验七、活性磷的测定 目的要求 1. 掌握钼蓝光度比色法测定磷酸盐的方法原理及实验条件。 2. 了解水体中各种不同形态磷的分离处理过程。 3. 验证盐度对吸光值的影响（设计）。 概述 水体中的磷主要以颗粒态和溶解态存在，以孔径为0.45μm醋酸纤维滤膜为界。不通过的为颗粒态，主要为含有机磷和无机磷的生物体碎屑及某些磷酸盐矿物颗粒；能通过0.45μm滤膜的为溶解态磷酸盐，包括有机磷和无机磷，其中溶解态无机磷是正磷酸盐，主要以HPO42-和PO43-的离子形式存在。 活性磷是指能与酸性钼酸铵试剂发生反应并可被定量分析的磷化合物，包括溶解态的无机正磷酸盐，部分溶解的有机磷、无机多聚磷酸盐和部分可溶于酸的颗粒态磷酸盐，以符号PO4-P表示。 实验七、活性磷的测定 水中磷的测定，通常按其存在的形式而分别测定总磷、溶解性正磷酸盐和总溶解性磷，无论何种形态的测定，目前都是将其转化为正磷酸盐的形态，然后按照正磷酸盐的测定方法进行。正磷酸盐的测定可采用离子色谱法（方法简单，灵敏度高，仪器贵重）、钼锑抗光度法（颜色稳定，重现性好）、氯化亚锡还原钼蓝法(显色不稳定，盐差大，干扰较多)，而孔雀绿—磷钼杂多酸法则灵敏度较高。罗丹明6G（Rh6G）荧光分光光度法灵敏度最高。 实验七、活性磷的测定 原理 钼蓝法测定活性磷是利用酸性介质中的活性磷与钼酸铵反应生成磷钼黄杂多酸，经适当的SnCl2溶液还原为蓝色的物质（俗称磷钼蓝），用分光光度计在690nm处测定溶液的趿光度，从工作曲线上查得活性磷酸盐磷的浓度。本法最低检出浓度为0.01mg/L，测定上限为0.3mg/L 左右。 主要仪器 分光光度计、1cm、25mL比色管、移液管、吸量管等。 实验七、活性磷的测定 试剂及其配制 1．钼酸铵溶液（10％） 5g钼酸铵固体[（NH4）6MoO24·4H20]，溶解后稀释至50ml，若溶液浑浊应取其澄清液贮于聚乙烯瓶中。 2．硫酸溶液（1∶1） 浓硫酸缓缓倒入同体积纯水中，混合可在冷水浴中进行。 3．钼酸铵—硫酸混合试剂： 1体积钼酸铵溶液与3体积硫酸溶液混合，混匀后贮于聚乙烯瓶中，此溶液避光保存可稳定数日，如发现变蓝须弃之重新配制。 4．SnCl2甘油溶液（2.5％） 称取二氯化锡固体（SnCl2·2H2O)溶于100ml甘油中，温热搅拌促其溶解，此溶液贮于棕色试剂瓶中。此溶液可稳定数日。 5．磷酸盐标准贮备液（0.3000mg/mL）：称取0.2636g磷酸二氢钾（KH2P04，优级纯，在110～115oC烘1～2h）溶于少量纯水，定量转移至200ml容量瓶，加纯水至标线，混匀，加1ml三氯甲烷（CHCl3）。此溶液1ml含0.3000mg磷（PO4-P）。若置于冰箱冷藏，可以稳定半年。 6．磷酸盐（PO4-P）标准使用液（3.00μg/mL） 量取1.00ml磷酸盐标准贮备液至100ml容量瓶中，加纯水到标线，混匀，加两滴三氯甲烷（CHCl3）。此溶液1.00ml含3.00μg磷。使用时当天配制。 实验七、活性磷的测定 操作步骤 1．工作曲线的制定 （1）取25ml比色管6支，分别按下表加入浓度为3.00μg/mL PO4-P的标准使用液Vs，用纯水定容至25.0ml，摇匀。 （2）分别加入钼酸铵一硫酸混合试剂0.5ml，混匀后放置3min；再分别加入SnCl2甘油溶液1滴，混匀后显色10min。 （3）用分光光度计在690nm波长处，于10mm比色皿中对照纯水测定上述溶液的吸光度Ai。以上述系列标准溶液测得的吸光度Ai扣除试剂空白（1号管）的吸光度，得到校正吸光度Ai’。以校正吸光度Ai’为纵坐标，绘制吸光度对氨氮浓度的标准曲线。 管号 1 2 3 4 5 6 ρ/（mg/L） 0 0.030 0.060 0.120 0.180 0.240 VS /mL 0 0.25 0.50 1.00 1.50 2.00 实验七、活性磷的测定 2．水样的测定 （1）量取适量水样（双样）于25ml比色管中，定容至25ml，参照标准曲线绘制过程中的步骤，显色并测定该水样的吸光度A水样。 （2）试剂空白：同时取25ml纯水，代替水样重复上述操作，获得试剂空白的吸光度A试剂（1号比色管即是）。 （3）浑浊度测定：另取上述同样水样2