养殖水环境化学实验：模块四.pptVIP

分光光度分析法： 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。包括比色法、可见分光光度法、紫外分光光度法、红外光谱法等。 1、基本原理：朗伯-比尔吸收定律 当一束平行单色光照射到有色溶液上时，光的一部分将被溶液吸收，一部分透过溶液，还有一部分被器皿的表面反射。在实际测量时，通常将试液和空白溶液分别置于同样质料及厚度的吸收池中，因而反射光强度基本不变（其余条件一致），其影响可以不予考虑。 设入射光的强度为Io，透过光强度为It，溶液浓度为c，液层厚度为b，则： A=kbc A：吸光度，k为比例常数 其中k的值随b、c的单位而变。当c为g/l时，k用a表示，称为吸收系数 当c为mol/l时，k用ε表示，称为摩尔吸光系数 ε反映吸光物质对光吸收能力，也反映用分光光度法测定该吸光物质的灵敏度， ε越大，方法的灵敏度愈高。 在多组分系中，如果各种吸光物质之间没有相互作用，这时体系的总吸光度等于各组分吸光度之和，即吸光度具有加和性。A总=A1+A2+A3+……+An 吸光度与透光度的关系： It/ Io=T 2、分光光度计基本部件：光源、单光器、吸收池（比色皿）、检测器、显示器 3、吸光度测量条件的选择 A、波长选择：以最大吸收波长为测量的入射波长——称为最大吸收原则。 B、吸光度范围的选择：A为0.2-0.8，T为65-15%；当A=0.434（T=36.8%）时测量的相对误差最小。 C、参比溶液的选择：进行测量时，利用参比溶液来调节仪器的零点，可以消除由于吸收池壁、溶剂、试剂对入射光的反射和吸收带来的误差，并扣除干扰的影响。参比溶液可根据下列情况来选择。 （1）纯溶剂空白：当试液、试剂及显色剂均无色时，可直接用纯溶剂（或蒸馏水）作参比溶液。 （2）试液空白：显色剂为无色，而被测试液中存在其他有色离子，可用不加显色剂的被测试液作参比溶液。 （3）试剂空白：试液无色，而试剂或显色剂有颜色时，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。 （4）显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其它试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可消除显色剂和一些共存组分的干扰。 （5）改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以此溶液作为参比溶液消除干扰。 4、标准曲线的制作 5、示差法测量高含量组分 * 实验五、水中亚硝酸盐的测定 目的要求 1. 掌握亚硝酸盐氮的测定原理和方法。 2. 熟悉分光光度计的使用方法。 3. 理顺氨氮的氧化与硝酸氮的还原的过程，为测定氨氮和硝酸盐氮奠定基础。 4．了解亚硝酸盐氮的快速测定方法。 实验五、水中亚硝酸盐的测定 概述 亚硝酸盐氮是无机氮化合物之一，是氨氮被氧化和硝酸氮被还原的中间产物，不稳定。通常以其亚硝酸根中的氮原子来计量，用符号N02-N表示。洁净地面水中亚硝酸盐氮的含量一般不超过0.01mg/L；海水中亚硝酸盐氮含量的变化幅度为0.1～30μg/L。 养殖水体中的亚硝酸盐氮对水生动物具有较强的毒性，作用机理主要是通过鱼类等的呼吸作用，亚硝酸盐由鳃丝进入血液，使正常的血红蛋白发生氧化，输氧功能受到影响，出现组织缺氧从而导致鱼虾缺氧，甚至窒息死亡。亚硝酸盐还可与仲胺类反应生成致癌性的亚硝胺类物质。 实验五、水中亚硝酸盐的测定 方法选择 水中亚硝酸盐氮的测定方法通常采用重氮—偶联反应，使生成红紫色染料。所用重氮和偶联试剂种类较多，最常用的一般有对氨基苯磺酸和α—奈胺，该法简便，灵敏度高，但盐度对吸光度有影响，而且试剂α—奈胺对人体有致癌作用，现今基本不再使用。磺胺（对氨基苯磺酰胺）和N-（1-萘基）-乙二胺盐酸盐（简称萘乙二胺）法灵敏度更高，反应速度快，试剂较为稳定，而且不受盐度等组分的影响，因此，该法是目前国内普遍采用的测定亚硝酸盐氮的方法。当将试剂配制成固体粉末时，适合于野外快速测定。此外，还有目前国内外普遍使用的离子色谱法和新开发的气相分子吸收法。这两种方法虽然须使用专用仪器，但方法简便、快速，干扰较少。 实验五、水中亚硝酸氮的测定 磺胺和萘乙二胺试剂法