畜禽繁育技术 模块八胚胎工程技术、畜禽繁育技术 107体外受精技术.pptVIP

LOGO 体外受精技术 体外受精技术 一、动物体外受精发展概况 二、体外受精的技术过程 一、动物体外受精发展概况 体外受精：体外受精是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。在生物学中，把体外受精经培植的胚胎移植到母体后获得的后代称为试管动物。这项技术成功于20世纪50年代。 一、动物体外受精发展概况 1981年Brackett等用体内成熟卵母细胞获得试管犊牛。 Hanada等(1985)获得绵羊和山羊体外受精后代。 Hanada等1986年获得体外成熟卵母细胞体外受精的第一头 犊牛。 进入20世纪90年代，世界上已有数十种动物的体外受精取 得了成功，牛的体外受精技术已在部分国家商业化应用于 畜牧生产。 迄今有20余种哺乳动物体外受精获得成功，如小鼠(1970) 、牛(1981)、绵羊(1985)、山羊(1985)、猪(1986)。上述 动物体外受精试验我国已于20世纪末期相继成功。 LOGO /379538905 1 利用遗传价值高的供体，通过活体取卵的方法获得卵母细胞来生产大量胚胎，实现胚胎生产的工厂化。；可为胚胎移植及相应生物工程提供充足而廉价的胚源。 2 将性别鉴定的体外生产的雄性肉牛胚胎双胚移植给受体牛，产下肉用犊牛育肥，可获得高档牛肉； 3 用意外死亡或屠宰的优秀母牛的卵巢生产胚胎，拯救遗传资源。为其他生物技术如动物克隆、动物转基因工程、胚胎干细胞培养等打基础。 一、动物体外受精发展概况 体外受精技术在畜牧业中具有广泛的应用前景，具体应用如下： Company Logo 卵母细胞的采集 1 2 精子的获能处理 3 3 体外受精及检查 4 4 二、体外受精的技术过程 卵母细胞成熟培养 5 体外受精卵的培养发育 1.卵母细胞的采集 (1)离体冲胚 从屠宰场采集卵巢，装入盛有生理盐水的保温瓶内保持在30～35℃，运回实验室，用注射器针头从卵巢上的卵泡中抽取卵母细胞。据国外报道，1头牛的卵巢可生产15～20枚可用胚胎。目前，我国屠宰母牛的卵巢来源的遗传品质不理想，屠宰母牛的遗传资料也不清楚。 1.卵母细胞的采集 （2）活体取卵 20世纪90年代初，用超声波或腹腔镜引导，经阴道穿刺，吸取有腔卵泡中的卵母细胞技术问世，这项技术称为活体取卵。这项技术的操作需要将B超主机连接一个阴道穿刺探头，穿刺针管路连接真空泵和一个收集管。术者用直肠把握的方式将探头插入阴道穹隆部，在直肠内的手将卵巢拿起，紧贴在探头所在的部位，在B超的屏幕上看见卵泡后，随穿刺线引导进针，吸取卵泡及卵母细胞。使用肝素等抗凝，使用一次性短针头、控制适当的真空压等措施可提高取卵效率。 1.卵母细胞的采集 （2）活体取卵 活体取卵技术作为超数排卵的替代方法，供体牛可每周采2次，重复数月，1头供体每年可生产100枚可用胚胎。采用此技术，优秀母牛可以用更多的种公牛交配组合，胚胎的遗传来源清楚，犊牛、青年牛、产后母牛、妊娠前3～4个月的牛也可采取卵母细胞，缩短了世代间隔。 2.卵母细胞成熟培养 选择卵丘细胞完整、形态良好的卵母细胞进行成熟培养。培养条件是39℃，5％二氧化碳，卵母细胞在培养皿液滴内培养约24 h。一般卵丘细胞显著扩张，从形态上可以确认达到成熟，在培养液中添加BSA(或犊牛血清)及促性腺激素、类固醇激素等可增加卵母细胞的成熟程度。 3.精子的获能处理  将精子放入人工合成的培养液中培养数小时。在培养液中添加肝素及咖啡因等利于精子获能。 4.体外受精及检查   将成熟卵子移入培养液的液滴中，加入获能的精子，置C02培养箱中共同孵育，隔一定时间检查受精情况，如出现精子穿人卵内，精子头部膨大，精子头部和尾部在卵细胞质内存在，第二极体排出，原核形成和正常卵裂等即确定为受精。  5.体外受精卵的培养发育  将受精卵移入新培养液滴中继续培养。为克服早期胚胎体外发育阻滞，并获得较高的发育率，多采用与卵丘细胞、输卵管上皮细胞等共同培养的方法，以使其发育至桑椹期或囊胚期，然后即可用于移植或其他生物工程的操作。 二、体外受精的技术过程  LOGO