NY-T-1743-2009-食用菌菌种真实性鉴定-RAPD法.pdfVIP

ICS 65．020 B61 NY 中华人民共和国农业行业标准 食用菌菌种真实性鉴定RAPD法 Verificationof for edible genuineness mushroom spawn--RAPD 2009—04—23发布 中华人民共和国农业部发布 NY／T1743--2009 刖 昌 本标准的附录A、附录c为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所、农业部微生物肥料和食用菌菌种质 量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：黄晨阳、张金霞、陈强。 NY／T1743--2009 食用菌菌种真实性鉴定RAPD法 1范围 本标准规定了利用RAPD技术鉴定食用菌菌种真实性的方法。 ostreatus)、白黄侧耳(Pleurotus 本标准适用于糙皮侧耳(Pleurotus rotus nebrodensis)、香菇(Lentinula auricula)、 edodes)、双孢蘑菇(Agaricusbisporus)、黑木耳(Auricularia cOTglatu5)、金针菇(Flammulina 茶树菇(Agrocybecylindrica)、鸡腿菇(Coprinus velutipes)、灰树花 种)。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法 1097 NY／T 2006食用菌菌种真实性鉴定酯酶同工酶电泳法 3原理 RAPD方法是以一系列不同的随机排列的寡聚核苷酸单链(通常为十聚体)为引物，对所研究的基 同基因组DNA序列有其特定的结合位点。这些特定的结合位点在基因组某些区域内的分布如符合 PCR扩增的反应条件，即在一定范围内模板DNA上有与引物互补的反相重复序列时，就可扩增出此范 围内的DNA片段。不同物种基因组DNA中的这种反相重复序列的数目和间隔的长短不同，就可导致 这些特定结合位点分布发生相应的变化，而使PCR产物增加、减少或发生分子量的改变。通过对PCR 产物的检测和比较，即可识别这些物种基因组DNA的多态片段。 4试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，水为GB／T6682规定的二级水。 4．1 70％乙醇溶液：见附录A．1。 4．2 1 mol／LTris-HCl(pH8．o)：见附录A．2。 43 0．5mol／L乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)溶液：见附录A．3。 4．4 cTAB提取缓冲液：见附录A．4。 45 TE缓冲液：见附录A．5。 46 50×TAE缓冲液：见附录A．6。 4．7加样缓冲液：见附录A．7。 4．8核酸染料：按使用说明操作。 4．9苯酚三氯甲烷一异戊醇溶液一25+24+1。 4．10三氯甲烷一异戊醇溶液=24+1。 Nv／3r 4”无水乙醇 4．12