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【代码M0901】酵母双杂交筛选简介和流程 2015-10-14实验管家 实验管家 实验原理 蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验。很早就已知道，转录活化蛋白可以和?DNA?上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA?结合与转录激活的功能是由转录活化蛋白上两个相互独立的结构域即?DNA?结合结构域(Binding Domain, BD)和转录活化结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录活化都是必须的。目前酵母双杂交实验采用的系统有?LexA?系统和?Gal4?系统两种。在?LexA?系统中，DNA?结合结构域由一个完整的原核蛋白?LexA?构成，转录活化结构域则由一个?88?个氨基酸的酸性的大肠杆菌多肽B42?构成，它在酵母中可以活化基因的转录;?在?Gal4?系统中，BD?和?AD?分别由?Gal4蛋白上不同的两个结构域(1-147aa?与?768-881aa)构成。在利用?GAL4?系统筛选?cDNA?文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA?结合结构域与靶蛋白即“诱饵”相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下，单独的?BD?可以与?GAL4?上游活化序列（GAL UAS）结合但不能引起转录，单独的?AD?则不能与?GAL