高效液相简介及常见问题剖析精编.pptVIP

高效液相色谱简介 简介 高效液相色谱法( High Performance Liquid Chromatography HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液 相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分 支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶 剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱, 在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分 析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域 中重要的分离分析技术应用  高效液相色谱简介 特点 高效液相色谱法有“四高一广”的特点 1.高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了 能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压2.高速:分析速度快、载液 流速快,较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30 分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时3.高效 分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果,比工业精 馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍4.高灵敏度:紫外检测器可 达001ng,进样量在μL数量级5.应用范围广:百分之七十以上的有 机化合物可用高效液相色谱分析,特别是髙沸点、大分子、强极性 热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势6.柱子可反复使用:用 根柱子可分离不同化合物7.样品量少、容易回收:样品经过色谱 柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备  高效液相色谱简介 此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回 收等优点,但也有缺点,与气相色谱相比各有所长,相互补充。高效 液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间,除了柱 子以外的任何死空间(进样器、柱接头、连接管和检测池等)中,如 果流动相的流型有变化,被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导 致色谱峰的加宽,柱效率降低。髙效液相色谱检测器的灵敏度不及气 相色谱 溶剂贮存器  高效液相色谱简介 HPLC仪器的配置及流程 色谱泵及控制器 数据处理及控制 B人程目色谱柱检测器 WHes 4:6 日 进样器 IIS ALL IMPORTANT  高效液相色谱简介 色谱分离的机理: 分离是一个一 Mobile ph 物理的过程。 目定相( Stationary Phase) 流动相( Mobile phase) Time 样品(溶解于流动相中的溶质) TSALL IMPORTANT  高效液相色谱简介 色谱的图形结果 色谱图:色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间 的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为保留时间 一色谱峰 峰宽 基线 峰高 时间(分) ● ITSALL IMPORTAN Waters  高效液相色谱简介 流动相一 构造 高压泵 脱气装置 进样阀色谱柱 检测器  高效液相色谱简介 高效液相色谱构造: 输液泵:多用柱塞往复泵, 柱塞向前运动,液体输出,流 向色谱柱;向后运动,将贮液 瓶中液体吸入缸体。如此往复 运动,将流动相源源不断地输 送到色谱柱中  高效液相色谱简介 高效液相色谱构造: 色谱柱:常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八 烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶 也有使用;离子交换填料用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用 于分子排阻色谱等 L接头  高效液相色谱简介 高效液相色谱构造: 色谱柱:在选定的条件下,注入供试品溶液或各品种项下规定的 内标物质溶液,记录色谱图化学键合固定相应用,量出供试品主成分 或内标物质峰的保留时间R)和半高峰宽W(h/2),按 n=554[(R)W(h2)]2计算色谱柱的理论板数,如果测得理论板数低 于各品种项下规定的最小理论板数,应改变色谱柱的某些条件(如柱 长、载体性能、色谱柱充填的优劣等),使理论板数达到要求 1.23