miR-155在树突状细胞抗白念珠菌固有免疫应答中的调节作用及其机制研究.pdfVIP

miR-155 在树突状细胞抗白念珠菌固有免疫应答中的调节作用 及其机制研究 白念珠菌(Candida albicans,C.albicans)作为一类条件致病菌,主要寄居 在人体的皮肤和粘膜(如口腔、消化道和阴道)表面。在机体免疫功能正常时,白 念珠菌与免疫系统维持相对稳态,不会引发感染;而当机体的免疫功能受到抑制 时,白念珠菌与机体共存的稳态被打破,白念珠菌迅速繁殖,由共生菌转为致病菌。 白念珠菌感染作为最常见的真菌感染,可有不同的临床表现,轻者常引发局 部粘膜损伤,重者可穿透组织、侵入外周血液循环,表现为播散性念珠菌病,严重 威胁患者生命。近些年来,由于抗生素滥用的现象仍未得到有效解决,且肿瘤放化 疗患者以及HIV 感染病人的日益增多,导致白念珠菌感染的发病率不断增高,而 且播散性感染的病死率居高不下,这些至今仍是难以解决的临床问题。 因此,研究白念珠菌的致病机制、特别是深入研究机体免疫系统抗白念珠菌 感染的调控过程,可为其相关的感染性疾病的治疗提供帮助。机体抵抗白念珠菌 感染的第一道防线是由树突状细胞(dendritic cells,DCs)、中性粒细胞、巨噬 细胞等组成的固有免疫应答系统。 该系统可以在第一时间通过非特异杀伤的方式清除致病菌,但持续时间不长 而且不具备免疫记忆功能。DCs 作为专职的抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APCs),其表面表达较高水平的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)。 这些PRRs 的主要生物学功能在于可以识别病原体表面的保守结构,即病原 体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),并由此开 启针对病原体感染的免疫应答。白念珠菌细胞壁的PAMPs 一旦被DCs 表面的PRRs 识别,可迅速活化DCs,分泌多种炎症因子和趋化因子,促进对白念珠菌的非特异 性免疫清除。 DCs 的活化机制十分复杂,其核心事件是NF- κB、核转录因子激活蛋白 -1(nuclear transcription factor activation protein-1,AP-1)等转录因子的 核转位,最终调节多种细胞因子和趋化因子的表达。另一方面,DCs 还可以通过 PRRs 吞噬病原体,并将病原体抗原加工、递呈给T 细胞,诱导T 细胞分化,指导后 续的特异性免疫应答的类型和持续时间。 固有免疫是获得性免疫的起点和驱动,而获得性免疫可在固有免疫的基础上 发挥更持久且具有记忆功能的免疫效应。值得注意的是,机体抗白念珠菌的免疫 应答过程需要多种机制的精细调控,若免疫反应强度过弱,则无法有效清除病原 体;但若免疫应答强度过高或持续时间太长,则容易导致机体组织的炎症性损伤。 microRNAs(miRNAs)是一类长度约20 个碱基左右的单链非编码RNA,可以与 靶基因mRNA 的3’非编码区(3’UTR)的碱基不完全互补结合,导致mRNA 发生降 解,或者直接抑制mRNA 的蛋白质翻译过程,从而发挥转录后水平的调节作用。 miRNAs 的作用特点是一个miRNA 可以同时在转录后水平对多个基因进行调节,而 一个基因的表达强度也可以受到多个miRNAs 的调节,miRNAs 对靶基因的调节具 有明显的时空特异性。 近些年来,越来越多的研究表明,miRNAs 在免疫细胞的发育和免疫应答的进 程中发挥不可忽视的调控作用。在前期的研究中,我们采用microRNA 芯片分析了 白念珠菌刺激单核源DCs 内miRNAs 的表达谱变化,结果发现多种miRNAs 异常表 达,其中miR-155 表达显著上调。 再者,以往的研究表明miR-155 在抗细菌、病毒的免疫反应中具有活跃的调 节功能,但目前miR-155在真菌感染免疫中的生物学功能尚不明确。基于以上研 究背景,本课题探讨了miR-155在树突状细胞抗白念珠菌感染的固有免疫应答中 的调节作用及其作用机制。 第一部分热灭活的白念珠菌对树突状细胞及CD4~+Th细胞的活化作用及功 能影响目的:研究白念珠菌感染对树突状细胞的成熟及其功能的影响,进而对 CD4~+Th细胞的活化和分化的影响。方法:采用磁珠分选的方法从人外周血中分 离CD14~+单核细胞和CD4~+Th细胞,加入GM-CSF和IL-4诱导CD14~+单核细胞分 化为未成熟的DCs。 用热灭活的白念珠菌刺激D