基因克隆及转基因方法.docxVIP

v1.0 可编辑可修改 基因克隆及转基因 一、基因克隆及转基因过程 1、设计引物 软件是，用到里面的 PrimerSelect 和 EditSeq 。 一般原则： 1、长度： 18-25 ； 2 、 GC含量： 40-60 ％，正反向引物相差不要大于 5%； 、 Tm值： 55 以上（到 65），实在不行 50 以上也可以，正反向引物相差不要大于 5； 、 3’端结尾最好是 GC，其次是 T，不要 A； 、正反向引物连续配对数小于4； 6 、在 NCBI 上的 Primer Blast 上看引物特异性如何； （如果克隆的话不能满足条件也没办法。 ） 不是必须条件，但可以考虑：多个基因设计引物时，可尽量使 Tm值相似，方便 PCR。 步骤： 一、打开 PrimerSelect 和 EditSeq 。 二、在 EditSeq 中输入你的序列。 引物有一对 F 和 R 1、对于 F 是从 5’到 3’，在序列的前部分选择长度为 18-25bp 的碱基，如果你 是要验证就随便选， 如果你是要克隆就在最开始选， 不符合原则就只能在你选的 后边增或减碱基。 2、将选择的 F 引物输入到 PrimerSelect 中，在 File 中选择 Enter New Primer ， 复制， OK，然后可以看到引物的情况，看看长度、 Tm、 GC含量是不是符合标准， 不符合就继续选。 3