2020实验二 蛋白质等电点及含量测定.pptVIP

1 实验二 蛋白质等电点及含量测定 ? 1 台可见光分光光度计配套 4 个玻璃比色杯，用完 务必立即洗净、晾干。切忌用试管刷或粗糙布 ( 纸 ) 擦拭。 ? 实验结束后，务必将使用过的玻璃器皿洗净、晾 干、放回原处。 【温馨提示】 P40/P51 2 ? 学习蛋白质的两性解离性质，掌握 pH 值法测定蛋 白质等电点的一般原理和操作方法。 ? 学习和掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和操 作方法。 【实验目的】 01 蛋白质等电点的测定 4 【 实验原理 】 —— pH 值沉淀法测定蛋白质等电点 ? 蛋白质是两性电解质，在溶液中存在如下平衡： 5 ? 蛋白质分子所带净电荷为零时的 pH 值称为 蛋白质的等 电点 （ pI ） 。在等电点时，蛋白质分子在电场中不向任 何一极移动，而且分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾 向增加，所以这时可以使蛋白质溶液的粘度、渗透压均 减到最低，且溶液变混浊。 ? 牛乳中的酪蛋白的等电点是 4.7-4.8 。本实验采用蛋白质 在不同 pH 溶液中形成的混浊度来确定，即混浊度最大 时的 pH 值即为该种蛋白质的等电点值。 【 实验原理 】 —— pH 值沉淀法测定蛋白质等电点 6 ? 实验仪器 ? 4 支 15mL 玻璃试管、移液管、吸耳球、移液枪 （ 200uL ）、枪头（