DB33T 2287-2020 罗氏沼虾双顺反子病毒-1检测规程.pdfVIP

ICS 65.020.30 CCS B 41 DB33 浙 江 省 地 方 标 准 DB33/T 2287—2020 罗氏沼虾双顺反子病毒-1 检测规程 Detection protocols for Macrobrachium rosenbergii dicistrovirus-1 2020 - 11 - 30 发布 2020 - 12 - 30 实施 浙江省市场监督管理局 发 布 DB33/T 2287—2020 引 言 本标准的发布机构提请注意如下事实，声明符合本标准时，可能涉及到6.10-6.11中引物与《罗氏 沼虾双顺反子病毒全基因组序列及其应用》(专利号：201110296487.9)专利权的使用。 本标准的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。 该专利持有人已向本标准的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本标准的发布机构备案。相关信息可以通过以下联 系方式获得： 专利持有人：浙江省淡水水产研究所 地址：浙江省湖州市吴兴区杭长桥南路999号 请注意除上述专利外，本标准的某些内容仍可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别这些专利 的责任。 II DB33/T 2287—2020 dTTP：脱氧胸苷三磷酸（Deoxythymidine triphosphate） EB：溴化乙啶，核酸染色剂（Ethidium bromide） MrDV-1: 罗氏沼虾双顺反子病毒-1 （Macrobrachium rosenbergii dicistrovirus-1） MrTV：罗氏沼虾太湖病毒（Macrobrachium rosenbergii taihu virus） M-MLV：莫洛尼鼠白血病病毒（Moloney murine leukemia virus） RdRp：RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase） RNA：核糖核酸（Ribonucleic acid） RNasin：核糖核酸酶抑制剂（RNase inhibitor） RT-PCR：逆转录-聚合酶链式反应（Reverse transcription polymerase chain reaction） Taq：水生噬热杆菌（Thermus aquaticus） 5 罗氏沼虾双顺反子病毒-1 检测程序的构成 罗氏沼虾双顺反子病毒-1检测程序包括5 个阶段，其中RT-PCR操作阶段又分3 个步骤。程序流程图 见图1。 图 1 罗氏沼虾双顺反子病毒-1检测程序流程图 2 DB33/T 2287—2020 鲜活幼体、仔虾及体长在3 cm以下稚虾个体样品约30 mg～50 mg (去掉稚虾眼)；成虾取约30 mg～ 50 mg鳃丝或游泳足。 所取样品分别置于1.5 mL无RNA酶微量离心管中，立即进行RNA提取操作或加入1 mL TRIz