组织细胞培养考试.pdfVIP

单选， 25 分 名解， 5 个， 10 分 简答，论述， 65 分 一、 名解 1. 原代培养 （primary Culture) 从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段。细胞群是异质的，细胞 相互依赖性强。细胞独立生存性差。 2. 传代培养 ：当细胞增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新培养液，继续接种进行培 养。这一过程称为传代。否则将影响细胞的继续生存。 3. 克隆形成率 （Cloning Efficiency) ：细胞被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆） 的百分数。 4. 细胞系（ cell line)：初代培养细胞一经传代后，称做细胞系。 5. 无限细胞系 ： 细胞获永久性增殖能力。核型大多变成异倍体。 6. 克隆细胞株 :从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法 ,由单细胞增殖 形成的细胞群 . 7. 细胞分裂指数 （Mitotic Index, MI) ：细胞群中每 1000个细胞中的分裂相数 . 8. 细胞相互接触能抑制细胞运动，这种现象称为 接触抑制 (contact inhibition) 。 9. 饲细胞 (Feeder cells)： 也称为滋养细胞，用成纤维细胞或其它细胞长成单层后，用大剂量射线照 射，使细胞失去增殖能力，但能存活和有代谢活动。将其作为底物，其它细胞接种上面；饲细胞 的代谢产物也有利于其它细胞生长。饲细胞用于：特殊难培养细胞，注意避免用同源细胞。 二、 大题 1 血清的主要作用 （1）提供细胞生存、生长和增殖所必需的生长调节因子。 （2 ）补充培养液中没有或量不足的营养成分。 （3）含有生长基质成分使细胞易贴附在培养器皿上。 （4 ）提供载体蛋白，可结合维生素、脂质、金属离子等。 （5）有中和毒性物质保护细胞不受伤害。 （6）提供蛋白酶抑制剂，保护细胞不受死细胞释放的蛋白酶的损害。 2 如何提高体外培养细胞的成活率 成功的关键 :培养物必须贴附在底物上 细胞生长和增殖 （1）组织和细胞的供体年龄 （2 ）培养条件：合理的培养基，血清，胰岛素 （3）贴附底物 (4) 培养方法：酶消化分离，注意浓度以及消化时间 3 培养用液有哪些？ （1）平衡盐溶液 （2 ）天然培养基 （3）合成培养基 （4）消化液 （5）pH 调整液： NaHCO3 溶液、 HEPES （分子量 238.31）溶液 (6) 抗生素溶液 4 以心肌细胞（神经元）为例，描述培养细胞的整个过程？ （一）取材 （二）组织的分离 1、将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置 75%酒精泡 2— 3 秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸 入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。 编辑版 word 2、用 Hank ’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。 3、用手术剪将肝脏剪成小块（ 1mm2），再用 Hank ’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。 4、视组织块量加入 5— 6 倍的 0.25%胰酶液， 37 ℃中消化20— 40 分钟，每隔 5 分钟振荡一次，或用吸管吹 打一次，使细胞分离 5、加入 3— 5ml 培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂） 。 6、静置 5— 10 分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。 7、 1000rpm，离心 10 分钟，弃上清液。 8、加入 Hank ’s液 5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。 9、加入培养液 l— 2 ml （视细胞量），血球计数板计数。 10、将细胞调整到 5 × 105/ml 左右，转移至 25ml 细胞培养瓶中， 37 ℃下培养。 大鼠大脑皮层神经组织细胞培养 组织来源 新生大鼠