蛋白质分离提取.ppt

综合性实验蛋白质的分离提取、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western印迹;蛋白质的分离提取;Ⅰ、蛋白质的盐析;Ⅱ、重金属盐和三氯乙酸沉淀蛋白质;Ⅲ、乙醇沉淀蛋白质;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量; 带电荷的质点，在一定条件的电场作用下，可向一极移动，如带正电荷的质点移向负极，这种现象称为电泳。许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子性质及其所在介质的pH及其组成。蛋白质是两性电解质，可带正电荷也可带负电荷。大部分蛋白质的PI﹤6,在PH 8.6的缓冲液中都带负电荷，在电场中向正极移动。移动的速度主要决定于带电荷的多少和分子的大小。电荷多、分子小，移动就快；反之就慢。;2020/12/2;影响电泳的主要因素 1.电泳介质的pH 当介质的pH等于某种两性物质的等电点时，该物质处于等电状态，即不向正极或负极移动。当介质pH小于其等电点时，则呈正离子状态，移向负极；反之，介质pH大于其等电点时，则呈负离子状态，移向正极。因此，任何一种两性物质的混合物电泳均受介质pH的影响，即决定两性物质的带电状态及电量。 2.缓冲液的离子强度 离子强度对电泳的影响是：离子强度低，电泳速度快，区带分离不清晰；离子强度高，电泳速度慢，但区分带分离清晰。如离子强度过低，缓冲液冲量小，不易维持pH的恒定；离子强度过高，则降低蛋白质的带电量（压缩双电层