生物人教版选修1课件专题5 3 血红蛋白的提取和分离.ppt

[ 随堂基础巩固 ] 1 ．在使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中，相对分子质量不同的 蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为 ( ) 解析： 蛋白质相对分子质量越大，越容易通过凝胶间隙而 先被洗脱出来，蛋白质相对分子质量越小越易进入凝胶内 部而后被洗脱出来。 答案： B 课题 3 血红蛋白的提取和分离 [ 自读教材 · 夯基础 ] 1 ． 蛋白质分离的理论依据 蛋白质特性的差异 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ①分子的 __________ ②所带 ______ 的性质和多少 ③溶解度 ④吸附性质 ⑤对其他分子的 _______ 亲和力 电荷 形状和大小 蛋白质分离的原理和方法 2 ． 分离的方法 (1) 凝胶色谱法： ①概念：也称做 ___________ ，是根据 ___________________ 分离蛋白质的有效方法。 ②凝胶 ? ? ? ? ? 形态：微小的 _________ 组成：大多数由 ______________ 构成 结构：内部有许多 ___________ 分配色谱法 相对分子质量的大小 贯穿的通道 多孔球体 多糖类化合物 ③原理：相对分子质量较小的蛋白质 ____ 进入凝胶内部的通 道 ， 路 程 _____ ， 移 动 速 度 较 慢 ， 通 过 凝 胶 的 时 间 _____ ； __________________ 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道， 只能在凝 胶外部移动，路程 _____ ，移动速度较快，通过凝胶的时间 _____ 。 (2) 电泳： ①概念：指 _________ 在电场的作用下发生 _____ 的过程。 ②原理： 在一定的 ____ 下， 多肽、 核酸等生物大分子的可解离 基团会带上 ___________ ，在电场的作用下，这些带电分子会向着 与其所带电荷 _____ 的电极移动。 pH 带电粒子 迁移 较短 容易 较长 较长 相对分子质量较大 较短 正电或负电 相反 ③影响电泳速率的因素： 各种分子 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? a._________ 差异 b. 分子本身 _____ 不同 c. 分子本身 _____ 不同 ――→ 产生 不同的 _________ ――→ 实现 各种分子的分离 ④方法：常用的电泳方法有 ___________ 电泳和 ___________ _____ 电泳。 形状 带电性质 大小 迁移速度 琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺 凝胶 3 ． 缓冲溶液 (1) 作用：在一定范围内，抵制外界的 _______ 对溶液 pH 的 影响，维持 pH 基本不变。 (2) 配制：由 1 ～ 2 种 _______ 溶解于水中配制而成，通过调节 缓冲剂的 _________ 就可以得到不同 pH 范围内使用的缓冲液。 酸和碱 缓冲剂 使用比例 [ 跟随名师 · 解疑难 ] 1 ． 凝胶色谱法 (1) 凝胶：是一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通 道，具有多孔的凝胶，又称为分子筛。 (2) 原理： 项目 相对分子质量大 相对分子质量小 直径大小 大于凝胶颗粒空隙直 径，被排阻在外面 小于凝胶颗粒空隙直径， 可以进入颗粒内部 运动方式 垂直向下移动 无规则扩散进入凝胶颗粒 运动速度 较快 较慢 运动路程 较短 较长 洗脱次序 先从凝胶柱洗脱出来 后从凝胶柱洗脱出来 2 ． 电泳的常用方法 (1) 琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，所以， 各种分子在电场中的迁移速率因各种分子的带电性质差异、 分子大小、形状不同而不同，从而得以分离。 (2) 聚丙烯酰胺凝胶电泳： ①凝胶形成： ②加入 SDS 的作用：使蛋白质发生完全变性，解聚成单条 肽链， 与各种蛋白质形成蛋白质 - SDS 复合物， SDS 所带负电荷 的量远远超过了蛋白质分子原有电荷量，掩盖了不同蛋白质间 的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 [ 特别提醒 ] 测定蛋白质相对分子质量通常用 SDS- 聚丙烯 酰胺凝胶电泳，原因是在一定浓度范围内聚丙烯酰胺对热稳 定性强，可用检测仪直接测定。 [ 自读教材 · 夯基础 ] 1 ． 样品处理 (1) 红细胞的洗涤： ①目的：去除 _______ ，以利于后续步骤的分离纯化。 ②过程： 杂蛋白 实验操作 (2) 血红蛋白的释放： ①目的：使红细胞破裂释放