2018_2019学年高中生物专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案新人教版选修1.docx

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。 ．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微 生物生长的培养基，称做选择培养基。 ．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。稀释涂布平 板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。 ．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择 培养基分离能分解尿素的细菌。 ．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示 剂，依据是否变红进行判断。 一、研究思路 1．筛选菌株 实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、 pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种 类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 2．统计菌落数目 (1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中 的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。 C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。 V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。 M：代表稀释倍数。 ③统计方法：为了保证结果准确，一般设置 3～5 个平板，选择菌落数在 30～300 的平板 进行计数，并取其平均值。 (2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。 3．设置对照 (1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。 - 1 - (2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 二、实验设计 1．土壤取样 从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。先铲去表层土，在距地表约 3～8 cm 的土壤层取样。 2．样品的稀释 稀释原因：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目。 稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在 30～300 之间， 便于计数。 3．微生物的培养与观察 培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。 观察：每隔 24_h 统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。 三、操作提示 1．无菌操作 取土样的用具在使用前都需要灭菌。 应在酒精灯火焰旁称取土壤，并在酒精灯火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好 棉塞。 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在酒精灯火焰旁操作。 2．做好标记：本实验使用的平板和试管比较多。为避免混淆，最好在使用前就做好标记。 3．制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提高工作效率。 四、菌种鉴定 ．原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，使培养基的碱性增强。 ．方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变 红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。 1．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 的培养基称做( ) A．鉴别培养基 B．加富培养基 C．选择培养基 D．基础培养基 解析：选 C 选择培养基是在培养基中加入特殊营养物质或化学物质，抑制不需要微生物 的生长，有利于所需微生物生长的培养基。 2．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释度下一同学做了若干个平板并 统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌株数真实值的是( ) A．菌落数目最多的平板 - 2 - ．菌落数目最少的平板 ．菌落数目适中的平板 ．取若干个平板上菌落数目的平均值 解析：选 D 用稀释涂布平板法对样品中活菌数目进行统计，只是一种估测，根据此方法 的实验过程可知，在某一稀释度下涂布的平板菌落数具有一定的偶然性，并不是绝对均匀， 所以取若干个平板上菌落数目的平均值比较接近样品中菌株数的真实值。 3．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比( ) ．比实际值高 ．比实际值低 ．和实际值一致 ．比实际值可能高也可能低 解析：选 B 培养基上的一个菌落也可能由相连的两个或多个菌体繁殖而来，并且该方法 测得的是活菌的菌落数目，未包括死细菌数，因此统计的活菌数要少于菌体实际值。 4．产生每个标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( ) ．一个细菌，液体培养基 ．许多细菌，液体培养基 ．一个细菌，固体培养基 ．许多细菌，固体培养基 解析：选 C 在微生物的培养中产生每个标准菌落的细菌的最初数目是一个细菌，使用的 培养基为固体培养基。 5．用以尿素为唯一氮源加入酚红指示剂的培养基，培养尿素分解菌后，指示剂将(