2020蛋白质浓度测定方法.pptVIP

四种古老的经典方法 ： 定氮法 双缩尿法（ Biuret 法） Folin －酚试剂法（ Lowry 法） 紫外吸收法 新的测定法： 考马斯亮蓝法（ Bradford 法） 更新的测定方法： BCA 法 分光光度计的使用 原理 光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼 可见的彩色光称为可见光，波长范围在 400 ～ 750nm ： 小于 400nm 的光线称为紫外光；大于 750nm 的光线称 为红外光。 当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部 分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后， 部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些 物质的定性定量分析。 依据 Lambert-Beer （朗伯－比尔）定律， 一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部 分，其 吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶 液厚度成正比 。 当入射光、吸收系数 K 和溶液的光径长度 L 不变时， 吸光度 A 与溶液的浓度 C 成正比。 具体测量时， 补充知识 ７２１型可见分光光度计 紫外分光光度计 微量凯氏（ Kjeldahl ）定氮法 原理 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解 产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变 成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨， 借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被 中和的程度可计算