-植物组织培养实验教学案.docx

实习二营养培养基配制 一、培养基母液配制 为了减少工作量，减少多次称量所造成的误差，一般将常用药品配成比所需浓 度高10—100倍的母液，现以 MS培养基为例，预先配制，四组不同母液，说明母 液的配制方法。b5E2RGbCAP MS培养基母液配制 单位：毫克 mg注意： ?大量元素按照使用时高 10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除 CaCl2 ? 2甩0单独配制外，其余化合物混合在 500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻 璃棒搅拌促溶，倒入 1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴 上标签注明化合物名称 或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名， CaCl2 ? 2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 p1EanqFDPw ?微量元素母液按要求浓缩 100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁 盐FeSO?7fO和NdEDTA.2H2O作为一组单独配制外，其余化合物分别置于烧杯 内加少量蒸馏水溶解后，混合定容在 1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标 签。DXDiTa9E3d .铁盐配制将 FeSO? 7H2O和NaEDTA.2H2O分别溶于 450ml蒸馏水中加热， 不断搅拌，溶解后两液混合，调 PH5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标 签。RTCrpUDGiT .有机物母液配制，按母液要求浓缩 50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其 余分别称量后，溶解，定容在 500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。 5PCzVD7HxA .母液最好在 2~4C的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长， 无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。 jLBHrnAILg 6. 制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学 药品必须是高纯度的 ＜分析纯）。 7. 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 、养培养基配制程序 （一 ＞母液吸取量的计算 成分 规定量 倍数 称取量 体积 配制1升 培养基吸 取量定容 编 号 种 类 I 大 量 兀 素 KNQ 1900 10 19000 1000 100 NH4NQ 1650 10 16500 MgS④ 7H2O 370 10 3700 KH2PQ 170 10 1700 CaCl2? 2H2O 440 10 4400 II 微 量 元 素 MnSO, 4H2O 22.3 100 2230 100 10 ZnSQ. 7H2O 8.6 100 860 HBQ 6.2 100 620 KI 0.83 100 83 NMoO, 7H2O 0.25 100 25 CuSO.5H2C4 0.025 100 2.5 C0CL2.6H2O 0.025 100 2.5 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO.4H 2O 27.8 100 2780 III 有 机 物 甘氨酸 2.0 50 100 500 10 盐酸吡哆醇 0.5 50 25 盐酸硫铵素 0.1 50 5 烟酸 0.5 50 25 肌酸 100 50 5000 配制培养基的升数 公式1 ：母液吸取量=母液体积x 母液浓缩倍数 培养基要求的含量 公式2 :母液吸取量= ＜各种生长调节剂） 母液每CC的含量 ＜二） 各种母液按顺序编号排列 A.大量元素；B.CaCl2.2H2O; C.微量元素；D.铁盐； ,E.有机物； F.生长素萘乙酸＜NAA :配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95%酒精 溶解后加蒸馏水定容至 1000ml ； G.细胞分裂素、激动素 ＜KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后，加蒸馏水定容至 100ml。xHAQX74J0X （三＞ 配制培养基 称取5-7g琼脂，30g蔗糖加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止 ? 各种母液的吸取 用50ml量筒量取大量元素母液 ＜A）和CaCl2 ? 2fO母液＜B）各100ml 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素 ＜C）,铁盐＜D）母液各10ml 用10ml移液管或吸管吸取有机物 ＜H） 10ml 用2ml移液管吸取生长素 NAA1.5ml;用0.5ml移液管吸取 KT0.5ml 将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至 80 C左右，定容 至1000ml，用酸度计或精密 PH试纸测定培养基的 PH 一般要求5.8~6.0，过酸过碱 则用 1NNaoH和 1N HCL 调整。LDAYtRyKfE 二、分装: :用一个接有胶管的分装器趁热装培养基， 1000ml 培养基分装70支 试管，即每支试管 15ml左右 ＜一般占试管、三角瓶容量 1/4~1/3 左