2020细菌遗传学与基因工程.pptVIP

第二节重组 DNA 技术的基本操作程序 （二）第二步 --- 基因表达载体 的构建 ? 1. 目的： 使目的基因能够 表达和发挥作用。 ? 2. 表达载体的组成： ? ①启动子： ? ②终止子： ? ③标记基因： 基因表达载体模式图 第二节重组 DNA 技术的基本操作程序 （二）第二步 --- 基因表达 载体的构建 ? 3 、构建步骤 ? ①酶切质粒 ? ②用同种限制酶切割目 的基因 ? ③适量的 DNA 连接酶， 结合成重组质粒。 第二节重组 DNA 技术的基本操作程序 （三）将目的基因导入受 体细胞 1 、转化： 2 、方法：受体种类不同，导入的 方法不同。 （ 1 ）导入植物细胞 Ⅰ、农杆菌转化法 Ⅱ、基因枪法（又称微弹轰击法） Ⅲ、花粉管通道法： （ 2 ）导入动物细胞 方法：显微注射 技术。 （ 3 ）导入微生物细胞 第二节重组 DNA 技术的基本操作程序 （三）将目的基因导入受 体细胞 4 、转化实质：目的基因整合到受体 细胞染色体基因组中。 3 、受体生物不同，所用的受体细胞 种类也不同。 （ 1 ）植物：可以是卵细胞（受精 卵）、体细胞（可经组织培养成 为完整个体）。 （ 2 ）动物：受精卵（因为体细胞的 全能性受到限制）。 第二节重组 DNA 技术的基本操作程序 ( 四 ) 第四步 --- 目的基因的 检测与鉴定 1 、导入检测： 2 、表达检测 （ 1 ）转