2020纸层析法分离鉴定氨基酸.pptVIP

实验二、纸层析法分离鉴定氨基酸 一、目的： 学习并掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的 原理和方法。 二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分 配层析法，其中滤纸纤维上吸附的 水是固定相 ， 展层用的 有机溶剂是流动相 。在层析时， 将样品点在距滤纸一端约 2 ～ 3cm 的某一处， 该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂 沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基 酸在两相中不断分配。由于分配系数（ K d ） 不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用 比移值（ R f ）来表示。 所谓 R f ，是指在纸层析中，从原点至氨基酸 停留点（又称为层析点）中心的距离（ X ）与 原点至溶剂前沿的距离（ Y ）的比值。如图 Y X R f ? ? 原点到溶剂前沿的距离 离 原点到层析点中心的距 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 层析纸质量等不变），某种物质的 R f 值是常 数，因此可作为定性依据。 由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本 实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、操作 ? 1. 在层析缸中装入展层剂，其高度约 1.5 ～ 2cm 。 ? 2. 准备滤纸 : 戴上手套，取层析滤纸（长